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荧光分光光度计注意事项
时间:2018-01-29 点击次数:1299

a. 请注意爱护液体比色皿,特别是测试有机样品的同学请在测量完毕后用有机溶剂清洗,干燥后再放入盒子中,否则会造成比色皿表面严重污染,影响透光度。

b. 固体样品池仅剩一个,测试完毕请物归原处。

测试完毕请注意登记,关闭仪器。

分子吸收、荧光、磷光辐射跃迁

无辐射跃迁——去活化过程

处于激发态分子不稳定,通过辐射或非辐射跃迁等去活化过程返回至基态 。这些过程包括:

1)振动弛豫

在液相或压力足够高的气相中,处于激发态的分子因碰撞将能量以热的形式传递给周围的分子,从而从高振动能层失活至低振动能层的过程,称为振动弛豫。

2)内转换

对于具有相同多重度的分子,若较高电子能级的低振动能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时,则电子可在重叠的能层之间通过振动耦合产生无辐射跃迁,如S2-S1;T2-T1。

定性分析

任何荧光都具有两种特征光谱:激发光谱与发射光谱。它们是荧光定性分析的基础。

1)激发光谱

改变激发波长,测量在zui强荧光发射波长处的强度变化,以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱。

激发光谱形状与吸收光谱形状完全相似,经校正后二者完全相同!这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过程。

激发光谱可用于鉴别荧光物质;在定量时,用于选择zui适宜的激发波长。

2)发射光谱

发射光谱即荧光光谱。一定波长和强度的激发波长辐照荧光物质,产生不同波长的强度的荧光,以荧光强度对其波长作图可得荧光发射光谱。

由于不同物质具不同的特征发射峰,因而使用荧光发射光谱可用于鉴别荧光物质。

使用荧光光度计检测荧光信号时,比色皿使用完毕要用有机溶剂清洗干净,防止比色皿污染导致测量值不准确,此外实验结束后,要将清洗好的比色皿干燥后再保存。

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