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紫外可见分光光度计含量测定方法-上海奥析UV1800PC
时间:2016-03-25 点击次数:2528

IgG含暈测定法

(紫外可见分光光度计含量测定方法-上海奥析UV1800PC紫外-可见分光光度法)

本法系依据免疫球蛋白G (IgG) 与相应的抗体特异

性结合后,在适宜的电解质、温度、p H 条件下,产生凝

集反应,形成抗原-抗体复合物,根据供试品的吸光度求

出供试品中I g G的含量。

试剂 1 )缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)

12. 42 g ,氯化钠9g、聚乙二醇6000 50g、牛血淸白蛋白

(BSA) lg、叠氮化钠(NaN3) l g ,加水溶解,用l.Omol/L

盐酸调p H 值至7. 4,加水稀释至1000ml

( 2 )抗人I g G血清按说明书要求将冻干抗人IgG

清复溶,按标示效价取一定量抗人I g G血清,加缓冲液稀

释至抗体zui终效价为1 : 4 (例如抗人I g G血清效价为1 ••

100,量取原液2 m l加抗体缓冲液48ml),充分混匀,

0.45!11膜过滤。4°C保存备用。

IgG标准品溶液的制备用生理氯化钠溶液将I g G

准品在每l m l0.2?6 . 0 m g范围内做适当的系列稀释

(通常做5个稀释度)。

供试品溶液的制备用生理氯化钠溶液将供试品稀释

成高、中、低3 个稀释度,其I gG含量均应在标准曲线范

围内。测定法取供试品溶液1(^1,加人已预热至37°C

抗体液l m l ,混匀,每个稀释度做2 管,置37°C水浴中保

1小时,充分混匀,照紫外-可见分光光度法(通则

0401),在波长3 4 0 n m处分别测定吸光度。

I g G标准品溶液10M1替代供试品溶液,同法

操作。

计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均

值。以标准品溶液的I gG含量的对数对其相应的吸光度的

对数作直线回归,求得直线回归方程,相关系数应不低于

0.99;然后将供试品溶液吸光度的对数值代人直线回归方

程,求得值的反对数,再乘以稀释倍数,求取每lml供试

品溶液I gG含量,再由供试品各稀释度I g G含量求平均

值,即为供试品I gG含量(g/L)

【附注】1 ) 全部反应管必须在1 0分钟内测量完毕。

( 2 )设置紫外分光光度计狭缝宽度(Slit Width)

2 n m 0

( 3 )每次测定可根据供试品I gG含量,适当调整标准

品溶液中I gG含量范围。

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