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分光光度计测定种公猪精液密度
时间:2018-10-09 点击次数:721

操作步骤
1.1 打开 721 型分光光度计电源开关和比色皿室的箱盖,使光电管在无光照情况下预热 20 min。
1.2 旋转波长调节器,选择 450 nm 为测定所需的单色光波长。
1.3 选择适当的灵敏度,一般先将灵敏度旋钮旋至低档位。
1.4 调 0%:打开比色皿室的箱盖(关闭光门),用零点调节器调节旋钮使电表指针在通光度(T 值)
为 0%处。1.5 调 100%:在比色皿中加入猪精液稀释剂溶液 4 mL,拉动拉杆使其置于光路中,盖上比色皿室箱盖(打开光门),调节光量调节旋钮,使电表指针在 T 值为 100%处。

1.6 反复调节旋钮,直到关闭光门和打开光门时指针分别指在 T 值为 0%和 100%处为止。

如果 T 值不能调节到 100%,就增大灵敏度,重新调 0%、100%。

1.7 待测溶液的配制:取比色皿一支(以容量为4 mL 比色皿为例),分别加入 3.6 mL 猪精液稀释剂溶液,0.4 mL 猪原精液混匀,用擦镜纸擦干比色皿透光面,使其光亮,无气泡。1.8 将待测溶液置于比色皿并放入比色皿室中,盖上箱盖,拉动拉杆将待测溶液置于光路中,此时从指针的位置读得待测溶液的 T 值或吸光率(A 值)。T 值或吸光率(A 值)根据对照表读取精液密度。

2 操作技巧
2.1 使用比色皿时,只能拿毛玻璃的两面,并且必须用擦镜纸擦干透光面,以保护透光面不受损坏或产生斑痕。用比色皿装液前必须用所装溶液冲洗 3 次,避免改变溶液的浓度。
2.2 生猪精液取样时应取精液瓶中间的液样。
2.3 生猪精液长期放置会下沉到容器底部,因此,取样时应摇匀,测量时速度要快,读数要准。


3 计算方法

利用分光光度计测出 T 值后,根据对照表读取精液密度(ρ),用于计算稀释液的加入量和确定分装瓶数,计算公式如下:
Y=ρ×V×m×(1-n)÷35(亿/瓶)

V1=Y×80(mL)

V2=V1-V0

注:ρ 为精液密度,V 为猪精液体积,m 为精子活力,n 为精子畸形率,Y 为瓶数,V0 为采精量,V1 为猪精液稀释后的体积,V2 为加入稀释液的体积。按照国家标准 GB/T 25172-2010,精液产品中总精液数为 30~35 亿个/瓶,每剂 80 mL。实际生产过程中,精子畸形率通过普通显微镜难以检测,因此,精子畸形率=0%,稀释后精子活力与之前保持不变。

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