当前位置:主页 > 新闻中心 > 酸性羧甲基纤维素酶活力含量测定紫外分光光度法
酸性羧甲基纤维素酶活力含量测定紫外分光光度法
时间:2016-06-22 点击次数:1477

〔含量测定〕酸性羧甲基纤维素酶活力对照品溶液的

制备取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每lml

3mg的溶液,即得。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液L 0ml20ml

4. 0ml6. 0ml80ml,分别置10ml量瓶中,各加水至刻度,摇__

匀。分别精密量取上述溶液各0= 5mU25ml具塞刻度试管

中,精密加入枸橼酸盐缓冲液pH t 8)15mU混匀,立即精密

加人35-二硝基水杨酸试液15ml,摇匀5置沸水浴中保温15

分钟,取出,置冰水浴中冷却10分钟,再加水至刻度,摇勻,静

90分钟,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法

(通则0401),在540nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐

标,葡萄糖量(mg)为横坐标,绘制标准曲线。

测定法取本品约LOg,精密称定9置具塞锥形瓶中,精

密加水100ml,密塞,旋转振摇(转速每分钟200转)6 0

钟,滤过,作为供试品溶液(本液应临用新制)。精密量取

1%羧甲基纤维素钠溶液15ml,置25ml具塞刻度试管中,

精密加人供试品溶液0. 5mU混匀550°C水浴中保温30

钟,取出n照标准曲线制备项下的方法,自立即精密加人3

5-二硝基水杨酸溶液L 50115依法测定吸光度5从标准曲

线上读出供试品溶液中含还原糖的重量(mg)。空白管加

1%羧甲基纤维素钠溶液15ml,置50°C水浴中保温30

分钟,取出,立即精密加人35-二硝基水杨酸试液L 5ml9

摇勻,精密加人供试品溶液05ml,混匀,照标准曲线制备

项下的方法,自置沸水浴中保温1 5分钟起,依法进行。

按下式计算:

X = A X l /0 . 5X100/W 1一水分)X2

式中X 酸性羧甲基纤维素酶活力,U /gl

A 吸光度在标准曲线上查得的还原糖量,mg;

W 取样量

2 时间换算系数。

l g 固体酶在50°C±l°CpH4. 8 条件下,1 小时水解1%

羧甲基纤维素钠底物,产生出相当于lm g葡萄糖的还原糖量

为一个酸性羧甲基纤维素酶活力单位,以U /g表示。

本品按干燥品计算,每l g 含酸性羧甲基纤维素酶活力不

得低于150U

 

注:[1]3,5-二硝基水杨酸试液:取苯酚69g,加10%

氧化钠溶液15ml使溶解,用水稀释至70ml,摇匀,再加亚硫

酸氢钠6. 9g,振摇使溶解(甲液取酒石酸钾钠255g,加

10%氢氧化钠溶液300ml使溶解,再加1%35-二硝基水

杨酸溶液880ml9摇匀(乙液);将甲液与乙液混合5摇勻,得黄

色的溶液,贮于棕色瓶中,4°C放置7 天,备用。

[2]构橼酸盐缓冲液pH 4. 8) :分别精密量取0. 5mol/L

枸橼酸溶液60ml0. 5mol/L枸橼酸三钠溶液100ml,混勻,精

密量取上述溶液100ml,加水800ml,3mol/L盐酸溶液或

3mol/L氢氧化钠溶液调节p H 值至48,移至1000ml量瓶

中,加水至刻度,摇匀,即得。

[3]1%羧甲基纤维素钠溶液;精密称取l .O g羧甲基纤维

素钠,置具塞锥形瓶中,精密加入枸橼酸盐缓冲液(PH4. 8)

80ml,称定重量,85°C±5°C边加热边磁力搅拌至完全溶解,

放冷,再称定重量,用枸橼酸盐缓冲液(PH4. 8)补足减失的重

量,摇勻,以3mol/L盐酸溶液或3mol/L氢氧化钠溶液调节

p H值至4. 8,移至100ml量瓶中,加枸橼酸盐缓冲液

(pH4.8)至刻度9摇匀,即得。

扫一扫,加微信

版权所有 © 2019 上海奥析科学仪器有限公司
备案号:沪ICP备13035263号-2 技术支持:化工仪器网 管理登陆 GoogleSitemap