第三法

原理在酸性条件下溴化氰与吡啶联苯胺发生显色反

应，采用紫外-可见分光光度法测定H ib多糖衍生物中溴化

氰的含量。

试剂 （1 )6 0%的吡啶溶液量取吡啶30ml，加水

20ml，摇匀，即得。

(2)2%盐酸溶液量取盐酸0.5ml，加水9. 5ml，摇匀，

即得。

(3 )吡啶联苯胺溶液取联苯胺0.5g，精密称定，加

60%吡啶溶液50ml使溶解，再加人2%盐酸溶液10ml，摇

匀，即得。临用前配制。

对照溶液的制备（1)0. 1 m g /m l溴化氰对照贮备液

取溴化氰10mg，精密称定，加乙腈适量使溶解，加水稀释

至100ml，摇匀，即得。临用前配制。

(2 )溴化氰对照工作液（500ng/ml) 精密量取溴化氰对

照贮备液lm l，加水稀释至200ml，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取多糖衍生物适量，配制成lOmg/ml

的溶液，即得。

测定法量取吡啶联苯胺溶液2. Oml，加水2. Oml，混

匀，2CTC以下、暗处放置1 5分钟后，在波长520mn处测定

吸光度，作为空白对照。

量取供试品溶液2. O m l加吡啶联苯胺溶液2. Oml, 混

匀，20X：以下、暗处放置1 5分钟后，在波长520nm处测定

吸光度。

分别量取溴化氰对照工作液0.1ml、0.2ml、0.4ml、

0.6ml、0.8m l、1. Om l于试管中，每管依次加水1.9ml、

1.8ml、1.6ml、1.4ml、1.2ml、1.0ml，加人P比嗤联苯胺溶

液2. Oml，混匀，20°C以下、暗处放置1 5分钟后，在波长

520mn处测定吸光度。

结果计算以对照工作液中溴化氰的含量（ng/ml) 对其

相应的吸光度作线性回归，求得线性回归方程，将供试品溶

液的吸光度代人线性回归方程，求得供试品溶液中溴化氰的

含量 B (n g/m l) 。

供试品中溴化氰的含量（ng/mg) = |

100