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上海奥析UV1901PC紫外分光光度计细胞色素C 活力测定法
时间:2016-08-26 点击次数:1128

上海奥析科学仪器有限公司UV1901PC紫外分光光度计细胞色素C 活力测定法细胞色素C 活力测定法

试剂(1 )磷酸盐缓冲液(0 .2 m o l /L ) 取磷酸氢二钠

71. 6 4 g ,加水使溶解成1000ml,作为甲液。另取磷酸二氢

27. 6 0 g ,加水使溶解成1000ml,作为乙液,取甲液81ml

与乙液1 9 m l ,混匀,调节p H 值至7. 3

( 2 )磷酸盐缓冲液(O .lm d /L ) 取磷酸盐缓冲液

(0. 2mol/L)500ml,加水稀释至 1000ml,调节 pH 值至 7. 3

( 3 )磷酸盐缓冲液(0.02mol/L) 取磷酸盐缓冲液

(0. 2mol/L) 100ml, 加水稀释至 1000ml, 调节 pH 值至 7. 3

(4 )琥珀酸盐溶液取琥珀酸与氢氧化钾各4. 72g,

水使溶解成1 0 0m l,调节p H 值至7. 3

(5 )qinhuajia 溶液取qinhuajia 0. 65g,加水使溶解成100ml

后,用稀硫酸调节p H 值至7. 3

(6 )去细胞色素C 的心悬浮液取新鲜猪(牛)心2 只,除

去脂肪与结缔组织,切成条,用绞肉机绞碎,置纱布兜中,

用水冲洗约2小时(经常搅动,挤出血色素),挤干,用水洗

数次,挤干,置磷酸盐缓冲液(0. Im o l/L )中浸泡约1 小时,

挤干,重复浸泡1次,用水洗数次,挤干,置组织捣碎机内,

加磷酸盐缓冲液(0.02md/L)适量恰使猪(牛)心浸没,捣成匀

浆,离心10分钟(普通离心机),取上层混悬液,加冰块少

量,迅速用稀醋酸调节p H 值至约5 . 5 ,立即离心1 5分钟,

166 .

 

取沉淀,加等体积的磷酸盐缓冲液(0. lm o l/L ) ,用玻璃匀浆

器磨匀后,贮存于冰箱中;临用时取1.0ml, 加磷酸盐缓冲

(0. lmol/L )稀释至 10ml

供试品溶液的制备取供试品,加水制成每lm l中含细

胞色素C 3mg的溶液。

测定法取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)5ml、琥珀酸盐溶

1.0ml与供试品溶液0 .5m l(如系还原型制剂,.应加人

O.Olmol/Lqinhuajia 溶液0_ 0 5 m l) ,25ml具塞比色管中,

加去细胞色素C 的心悬浮液0. 5m lqinhuajia 溶液1. Oml,

水稀释至1 0 m l,摇匀,以同样的试剂作空白,照紫外-可见

分光光度法(通则0401),在550nm的波长处附近,间隔

0.5mn找出zui大吸收波长,并测定吸光度,直至吸光度不再

增大为止,作为酶还原吸光度;然后各加连二亚硫酸钠约

5m g ,摇匀,放置约10分钟,在上述同一波长处测定吸光

度,直至吸光度不再增大为止,作为化学还原吸光度;按下

式计算:

细胞色素C 活力=

化学还原吸光度

X100%

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