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紫外分光光度法测定参须中人参总皂苷的含量
点击次数:660 发布时间:2018-10-12

人参(Radix Ginseng)为五加科植物人参(Panax ginseng C. A. Mey.)的干燥根,中国药典记载,人参性 平,味甘、微苦。归脾、肺、心经。具有大补元气,复 脉固脱,补脾益肺,生津,安神的功效[1]。根据传统用 药经验,人参主根和须根均作为人参入药,随着人参炮 制加工方法的发展,市场上逐渐出现人参主根和须根两 个不同的用药部位,经验普遍认为人参主根的人参皂甙 含量相高于参须,主根的市场价格也高于须根。目前研 究人参的药用部位多为其主根,对须根的研究比较少。 本研究建立参须中人参总皂苷含量测定的方法,实验结 果表明该方法准确、快速,为参须的深入研究及质量控 制提供了更加可靠的方法。 1  仪器与试药 1.1  仪器  紫外分光光度计旋转蒸发器;分析天平(万分之一,  ;高速匀浆机 ;恒温水浴 锅;超声波清 洗器;循环水式 多用真空泵(。 1.2  试药  参须药材由广州中 医药大学中药学院赖小平教授鉴定为参须药材;人参皂 苷 Re 对照品(中国食品药品检定研究院,批号: 11041201)。香草醛(批号:20100315,);高氯酸(批号:20100904,);冰醋酸(批号:20090320);乙醇(批号 20100806),均为分析纯。 2  方法与结果 2.1  对照品溶液与供试品溶液的制备  对照品溶液的 制备:取干燥的人参皂苷 Re 对照品 6mg,精密称定,置 5ml 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得 人参皂苷 Re 对照品储备液。再精密移取储备液 2ml 至 
 10ml 量瓶中,加甲醇定容,摇匀,即得浓度为 0.2412mg/ ml 的人参皂苷 Re 对照品溶液。 供试品溶液的制备:分别取 20100111 批样品约 0.05g,0.1g,0.2g,置圆底烧瓶中,加 75%乙醇 50ml, 加热回流 1.5h,放冷,滤过,滤渣用乙醇洗涤 2~3 次, 收集滤液,减压浓缩至无醇味,用 20ml 的蒸馏水溶解, 转移至分液漏斗中。萃取 3 次(20ml/10ml/5ml), 弃去层。水层加入水饱和正丁醇萃取 4 次 (30ml/20ml/15ml/10ml),合并正丁醇萃取液,减压回 收正丁醇至干,用甲醇分次洗涤、转移至 25ml 容量瓶 中,甲醇定容。 2.2  测定波长的选择  精密吸取人参皂苷 Re 对照品溶 液 0.6ml,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加 入冰醋酸 5ml,摇匀即得待测定对照品溶液[4]。同时取供 试品溶液 0.6ml,按待测对照品溶液的显色方法进行显色 制备即得待测定供试品溶液。 照紫外-可见分光光度法(2010 版药典附录 V A )[5] 测定。结果:人参皂苷与香草醛-高氯酸试剂显色后,于 540-560nm 处有明显紫外吸收,而且在 555nm 处有大 吸收,所以选择测定波长为 555nm。 
 2.3  线性关系考察  精密吸取人参皂苷 Re 对照品溶液 0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml 、0.8ml,水 浴蒸干,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加 入冰醋酸 5ml,摇匀[2],于波长 555nm 处测定各溶液的吸光度。以人参皂苷 Re 重量(mg)为横坐标,以吸光度为 纵坐标,绘制标准曲线。实验结果显示人参皂苷在 24.12~193.00μg 范围内呈良好的线性关系,相关系数 r 为 0.9996,回归方程为 Y=4.997X+0.002809。 2.4  精密度试验  精密吸取浓度为 0.2412mg/ml 人参皂 苷 Re 对照品溶液 0.6ml,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水 冷却 10min,加入冰醋酸 5ml,摇匀,于 555nm 处连续 测定吸光度 5 次。结果测定值的 RSD 为 1.8%,提示仪 器精密度良好。 2.5  稳定性试验  取 20100111 批样品约 0.1g,精密称 定,按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备,精密量 取 0.3ml,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加 入冰醋酸 5ml,摇匀,在显色后 20min、25min、30min、 35min、45min、60min,于 555nm 处测定吸光度。结果 显示:在 60min 内测定值的 RSD 为 1.5%,表明溶液在 1h 内稳定,故本实验确定在显色后 1h 内测定。 2.6  重复性试验  取 20100111 批样品约 0.1g ,取 6 份, 精密称定,按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。 分别精密量取供试品溶液各 0.3ml,水浴蒸干,加入 5% 的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴 加热 15min,冰水冷却 10min,加入冰醋酸 5ml,摇匀, 于 555nm 处测定吸光度,计算各份供试品溶液中人参皂 苷含量。结果参须中人参总皂苷含量为 81.47mg/g,SD 为 2.0,RSD 为 2.5%,提示本试验重复性良好。 2.7  加样回收率试验  人参皂苷 Re 对照品储备液的制 备:精密称取人参皂苷 Re 对照品 0.04004g,置 10ml 容 量瓶中,加甲醇定容,摇匀,即得浓度为 4.004mg/ml 的 人参皂苷 Re 对照品溶液。 取 20100111 批样品约 0.05g,6 份,精密称定,再 分别精密量取人参皂苷 Re 对照品储备液 1ml,按照供 试品制备方法制备,分别精密量取供试品溶液 0.3ml, 水浴蒸干,加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加 入冰醋酸 5ml,摇匀,于 555nm 处测定吸光度,计算每 份溶液人参总皂苷含量。结果表明平均加样回收率为 102.3%,RSD 为 2.8%,提示该测定方法准确度高,结 果见表 1。 号为 20100111,20100823,20100824 参须药材约 0.1g, 精密称定,按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。 分别精密吸取待测溶液 0.3ml 至刻度试管中,水浴蒸干, 加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml,在 60 ℃下水浴加热 15min,冰水冷却 10min,加入冰醋酸 5ml, 摇匀,于 555nm 处测定吸光度。人参总皂苷百分含量按 干燥品算,依次为 0.81%,1.01%,1.00%,均符合药典 人参总皂苷不得低于 0.8%的要求,结果见表 2。 
3  讨论 本项目以人参总皂苷为指标性成分,采用 5%香草醛 -高氯酸对溶液进行显色处理,显色的原理为高氯酸使皂 苷的羧基脱水,增加双键结构,再经双键位移,双分子 缩合等反应生成共轭双键系统,又在酸的作用下形成阳 碳离子盐而显色,从而可用紫外-可见分光光度法(比色 法)测定总人参皂苷的含量。 本研究采用紫外分光光度法测定参须中人参皂苷的 含量,该方法简便,准确度高,重现性好,可以作为参 须中人参皂苷含量的测定方法。

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