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紫外分光光度法测定小白花地榆总皂苷含量
时间:2018-10-12 点击次数:764

 目的:测定小白花地榆中总皂苷的含量。方法:以地榆皂苷Ⅰ为对照品,采用紫外分光光度法,在波长 323nm 处, 测定总皂苷含量。结果:小白花地榆中总皂苷含量为6. 44% 。结论:该方法速度快、重现性好,结果可靠。 

中药地榆作为药用已有2000 多年的历史,地榆以根入 药,始载于《神农本草经》 [1] 。具有凉血止血,解毒敛疮的功 效。临床上可用于治疗血痢、崩漏、水火烫伤、便血[2]。黑龙 江省野生地榆属资源主要有地榆( Sanguisorba officinalis L. ) 、小白花地榆( Sanguisorba parviflora ( Maxim. ) Takeda) 、 垂穗粉花地榆( Sanguisorba tenuifolia Fish. ex Link) 等物种。 《中华本草》中记载,地榆属植物小白花地榆、粉花地榆功效 同药用地榆,产地替代地榆入药[3]。地榆主要含有鞣质及皂 苷类成分[4],其所含地榆总皂苷具有单独或协同细胞因子的 促造血细胞增殖作用[5]。目前,对于小白花地榆的相关研究 鲜有报道。本实验对黑龙江省野生小白花地榆的所含地榆 皂苷成分进行含量测定,为进一步开发利用黑龙江省野生地 榆属植物奠定基础。 方法与结果 2. 1 测量波长的选择 精密称取2mg 已干燥恒重的地榆皂 苷 I 对照品,以浓硫酸定容至50mL,70℃水浴 40 min ,冰 水浴中冷却至室温,以浓硫酸为参比液,用紫外分光光度计, 在190 ~400nm 范围内进行扫描,该体系在紫外 323nm 处有 特征吸收峰。确定测定波长为323nm。 2. 2 反应温度与反应时间的优化 精密称取2mg 已干燥恒 重的地榆皂苷 I 对照品,以浓硫酸定容至50mL,置于设定温 度( 40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90 ℃) 水浴中,定时取样, 测定323nm 处的吸光度。至吸光度不再升高,即可认为反 应已达完全。平行试验 3 次,终结果显示在40℃、50℃、 60℃、70℃、80℃、90 ℃条件下,总皂苷完全反应所需的时间 分别为100、 80、 60、 40、 20、10 min。在反应温度70℃,反应时 间40 min 时,OD323nm值大,故确定其为反应反应温度 与反应时间。
2. 3 总皂苷含量测定 2. 3. 1 对照品溶液配制 精密称取 5. 02mg 地榆皂苷 I 于 25mL 容量瓶中,加浓硫酸定容至刻度,超声溶解,置于 70℃ 水浴中加热 40min 后,冰水浴中冷却至室温,即得( 每 1mL 中含0. 2008mg) 。 2.3. 2 供试品溶液的配制 精密称取250mg 小白花地榆药 材粉末,加入 25mL 甲醇,超声提取 30min,将滤液浓缩至干 后,30%的氨试液 15mL 溶解,转移至分液漏斗中,加入 15mL 水饱和正丁醇,充分振摇,静置,分层,重复正丁醇萃取 操作1 次。合并2 次萃取液于烧瓶中,减压浓缩至干。残渣 用适量浓硫酸超声溶解,并转移到 100mL 容量瓶中,加浓硫 酸定容至刻度,按照2. 2 项下优化后反应条件进行后,冰水 浴中冷却至室温,得供试品溶液。 2. 3. 3 方法学考察 2. 3. 3. 1 标准曲线的建立 精密吸取地榆皂苷 I 对照品储 备液0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0mL 分别置于 5mL 容量瓶中,加 入浓硫酸稀释定容至刻度,摇匀,备用。分别精密吸取上述,按紫外分光光度法,在 323nm 波长处测定吸光度值,以吸光度( Y,OD323nm) 为纵坐标,浓度( X, μg/ mL) 为横坐标,绘制标准曲线,进行回归分析,得回归方 程: Y =0. 048X +0. 2977,r =0. 9980。结果表明,对照品溶液 在20. 08 ~160. 64μg/ mL 浓度范围内线性良好。 2. 3. 3. 2 精密度试验 精密吸取对照品储备液( 0. 0201mg/ mL) 2mL,重复测定6 次 OD323nm,RSD = 0. 68% ( n = 6) 。表 明仪器精密度良好。 2. 3. 3. 3 对照品稳定性试验 取对照品溶液( 0. 0201mg/ mL) 2 mL,放置 0, 1, 2, 4,8 h,测定 OD323nm,测得 RSD = 0. 89%,表明对照品溶液在8h 内稳定。 2. 3. 3. 4 样品重复性试验 取50mg 药材样品平行5 份,照 制备供试品溶液方法,测 OD323nm,RSD = 1. 43% 。表明该方 法重复性良好。 2. 3. 3. 5 加样回收率试验 精密称取已测知含量的药材样 品,分别精密加入一定量对照品溶液( 0. 0201mg/ mL) ,按照 样品制备与测定方法,平行做6 组,结果见表1。

3 讨 论 

3. 1 关于皂苷成分的含量测定方法,文献中采用较常用的 显色体系有香草醛 - 冰醋酸 - 高氯酸、甲醇 - 浓硫酸[7]、 香草醛 -硫酸[8]、香草醛 - 高氯酸[9]、高氯酸[10]等,本实验根据地榆皂苷具有的糖基能被浓硫酸氧化脱水成糠醛衍生 物性质,采用浓硫酸作为显色试剂,与其他显色体系相比具 有操作简便、反应灵敏、重现性好的优

 目的:测定小白花地榆中总皂苷的含量。方法:以地榆皂苷Ⅰ为对照品,采用紫外分光光度法,在波长 323nm 处, 测定总皂苷含量。结果:小白花地榆中总皂苷含量为6. 44% 。结论:该方法速度快、重现性好,结果可靠。 

中药地榆作为药用已有2000 多年的历史,地榆以根入 药,始载于《神农本草经》 [1] 。具有凉血止血,解毒敛疮的功 效。临床上可用于治疗血痢、崩漏、水火烫伤、便血[2]。黑龙 江省野生地榆属资源主要有地榆( Sanguisorba officinalis L. ) 、小白花地榆( Sanguisorba parviflora ( Maxim. ) Takeda) 、 垂穗粉花地榆( Sanguisorba tenuifolia Fish. ex Link) 等物种。 《中华本草》中记载,地榆属植物小白花地榆、粉花地榆功效 同药用地榆,产地替代地榆入药[3]。地榆主要含有鞣质及皂 苷类成分[4],其所含地榆总皂苷具有单独或协同细胞因子的 促造血细胞增殖作用[5]。目前,对于小白花地榆的相关研究 鲜有报道。本实验对黑龙江省野生小白花地榆的所含地榆 皂苷成分进行含量测定,为进一步开发利用黑龙江省野生地 榆属植物奠定基础。  方法与结果 2. 1 测量波长的选择 精密称取2mg 已干燥恒重的地榆皂 苷 I 对照品,以浓硫酸定容至50mL,70℃水浴 40 min ,冰 水浴中冷却至室温,以浓硫酸为参比液,用紫外分光光度计, 在190 ~400nm 范围内进行扫描,该体系在紫外 323nm 处有 特征吸收峰。确定测定波长为323nm。 2. 2 反应温度与反应时间的优化 精密称取2mg 已干燥恒 重的地榆皂苷 I 对照品,以浓硫酸定容至50mL,置于设定温 度( 40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90 ℃) 水浴中,定时取样, 测定323nm 处的吸光度。至吸光度不再升高,即可认为反 应已达完全。平行试验 3 次,终结果显示在40℃、50℃、 60℃、70℃、80℃、90 ℃条件下,总皂苷完全反应所需的时间 分别为100、 80、 60、 40、 20、10 min。在反应温度70℃,反应时 间40 min 时,OD323nm值大,故确定其为反应反应温度 与反应时间。
2. 3 总皂苷含量测定 2. 3. 1 对照品溶液配制 精密称取 5. 02mg 地榆皂苷 I 于 25mL 容量瓶中,加浓硫酸定容至刻度,超声溶解,置于 70℃ 水浴中加热 40min 后,冰水浴中冷却至室温,即得( 每 1mL 中含0. 2008mg) 。 2.3. 2 供试品溶液的配制 精密称取250mg 小白花地榆药 材粉末,加入 25mL 甲醇,超声提取 30min,将滤液浓缩至干 后,30%的氨试液 15mL 溶解,转移至分液漏斗中,加入 15mL 水饱和正丁醇,充分振摇,静置,分层,重复正丁醇萃取 操作1 次。合并2 次萃取液于烧瓶中,减压浓缩至干。残渣 用适量浓硫酸超声溶解,并转移到 100mL 容量瓶中,加浓硫 酸定容至刻度,按照2. 2 项下优化后反应条件进行后,冰水 浴中冷却至室温,得供试品溶液。 2. 3. 3 方法学考察 2. 3. 3. 1 标准曲线的建立 精密吸取地榆皂苷 I 对照品储 备液0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0mL 分别置于 5mL 容量瓶中,加 入浓硫酸稀释定容至刻度,摇匀,备用。分别精密吸取上述,按紫外分光光度法,在 323nm 波长处测定吸光度值,以吸光度( Y,OD323nm) 为纵坐标,浓度( X, μg/ mL) 为横坐标,绘制标准曲线,进行回归分析,得回归方 程: Y =0. 048X +0. 2977,r =0. 9980。结果表明,对照品溶液 在20. 08 ~160. 64μg/ mL 浓度范围内线性良好。 2. 3. 3. 2 精密度试验 精密吸取对照品储备液( 0. 0201mg/ mL) 2mL,重复测定6 次 OD323nm,RSD = 0. 68% ( n = 6) 。表 明仪器精密度良好。 2. 3. 3. 3 对照品稳定性试验 取对照品溶液( 0. 0201mg/ mL) 2 mL,放置 0, 1, 2, 4,8 h,测定 OD323nm,测得 RSD = 0. 89%,表明对照品溶液在8h 内稳定。 2. 3. 3. 4 样品重复性试验 取50mg 药材样品平行5 份,照 制备供试品溶液方法,测 OD323nm,RSD = 1. 43% 。表明该方 法重复性良好。 2. 3. 3. 5 加样回收率试验 精密称取已测知含量的药材样 品,分别精密加入一定量对照品溶液( 0. 0201mg/ mL) ,按照 样品制备与测定方法,平行做6 组。

3 讨 论 

3. 1 关于皂苷成分的含量测定方法,文献中采用较常用的 显色体系有香草醛 - 冰醋酸 - 高氯酸、甲醇 - 浓硫酸[7]、 香草醛 -硫酸[8]、香草醛 - 高氯酸[9]、高氯酸[10]等,本实验根据地榆皂苷具有的糖基能被浓硫酸氧化脱水成糠醛衍生 物性质,采用浓硫酸作为显色试剂,与其他显色体系相比具 有操作简便、反应灵敏、重现性好的优势。 3. 2 采用紫外分光光度法测定小白花地榆中总皂苷含量, 以浓硫酸为显色试剂,反应条件为反应温度70℃,反应时间 40min,该方法简便、准确、灵敏、重现性好。 3.3 测定小白花地榆中总皂苷含量可为下一步开发利用小 白花地榆提供理论依据。为黑龙江省野生地榆属资源的开 发奠定基础。

势。 3. 2 采用紫外分光光度法测定小白花地榆中总皂苷含量, 以浓硫酸为显色试剂,反应条件为反应温度70℃,反应时间 40min,该方法简便、准确、灵敏、重现性好。 3.3 测定小白花地榆中总皂苷含量可为下一步开发利用小 白花地榆提供理论依据。为黑龙江省野生地榆属资源的开 发奠定基础。

 

 

 

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