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液相色谱法对比紫外分光光度计法测定奥硝唑片的含量
时间:2018-10-29 点击次数:662

 引言 奥硝唑是继甲硝唑、替硝唑后第三代硝基咪唑类的 抗厌氧菌及抗原虫药物。其疗效高,不良反应小,疗程短,使 其在临床上深受医生和患者的厚爱 [1]。2015版药典中推荐 使用液相色谱法来分析本品 [2],但相对来说紫外分光光 度法仪器设备要求简单,检测时间快捷,该法是否可以作为 本品基层药物监测的备选方法值得考察。本文由此出发,对 比分析液相及紫外分光光度法测定奥硝唑含量。

1   仪器与试药 安捷伦 1200 液相色谱仪;岛津 UV-2600 型紫外分 光光度计;梅特勒 - 托利多 XP204 和 XPE205 电子分析天平。 奥硝唑对照品(购自中国食品药品检定研究院,批号 100608201102,含量:100%)。水为超纯水,甲醇为色谱纯,其他试 剂均为分析纯。奥硝唑片( 规格 0.25g,批号 160404、160801、160910)。

2   实验方法

2.1   液相色谱法

2.1.1   色谱条件 [2] 色 谱 柱 选 择 Agilent Eclipse C18 (4.6×250mm,5μm), 流动相为甲醇 - 水(20:80),流速为 1.0mL/min,检测波长为 318nm,柱温为 25℃,进样量 10μl。

2.1.2   供试品溶液的制备 取供试品 20 片,精密称定,研细,精密称取适量(相当于 奥硝唑 50mg),置于 100mL 容量瓶中,加流动相振摇使奥硝 唑溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液 2mL,置 50mL 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.1.3   对照品溶液的制备 精密称取奥硝唑对照品 10.35mg 于 100mL 容量瓶中,用 流动相溶解并稀释至刻度,摇匀即得。

2.1.4   线性关系考察 分别精密移取“

2.1.3”项下对照品溶液 0.5mL、1.0mL、 2.0mL、5.0mL、10.0mL 于 20mL 容量瓶中,使用流动相稀释至 刻度,摇匀,得到系列标准溶液。按照“2.1.1”项下色谱条件 进行测定,以浓度 X 为横坐标,峰面积 Y 为纵坐标,得回归方 程为 Y=14.895X+1.9243,r=0.9998(n=6),结果表明奥硝唑浓 度在 2.59μg·mL -1~51.75μg·mL -1 范围内呈良好的线性关系。

2.1.5   精密度试验 选择“2.1.3”项奥硝唑对照品溶液,重复进样 6 次,分别测定峰面积,奥硝唑峰面积的 RSD=0.84%(n=6),表明本仪器 精密度良好。

2.1.6   重复性试验 选择同一批号样品(批号 160404),按“2.1.2”项平行 制备6 份供试品溶液,分别测定含量,结果奥硝唑含量的 RSD=0.68%(n=6),表明该含量测定方法具有较好的重复性。

2.1.7   稳定性试验 选择同一供试品溶液,分别于 0h、2h、4h、6h、8h 进样,考 察其稳定性,结果奥硝唑峰面积的 RSD 为 1.3%(n=5),表明 供试品溶液在 8h 内较为稳定。

2.1.8   回收率试验 分别取奥硝唑对照品 20mg、25mg、30mg 各三份,精密称 定,加入空白辅料混合均匀,置 100mL 容量瓶中,用流动相溶 解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取 5mL,置 50mL 容量瓶 中,加流动相至刻度。照“2.1.1”项色谱条件测定峰面积,按 外标法计算回收率,结果见表 1。

2.2   紫外分光光度法

2.2.1   检测波长的选择 取奥硝唑对照品适量,精密称定,用乙醇溶解并稀释成 每 1mL 中含 10ug 的溶液,在 210~340nm 的波长范围内进行 扫描,奥硝唑在 312nm 的波长处有大吸收,确定本品采用 紫外分光光度法测定含量时的检测波长为 312nm。

2.2.2   供试品溶液的制备: 参考文献[3],取供试品 20 片,精密称定,研细,精密称 取适量(相当于奥硝唑 100mg),置 100mL 容量瓶中,加乙醇 75mL,振摇使奥硝唑溶解,加乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精 密量取续滤液 1mL,置另一 100mL 量瓶中,加乙醇稀释至刻 度,摇匀,作为供试品溶液。

2.2.3   标准曲线及线性范围考察 精密称取奥硝唑对照品 10.38mg,置 100mL 量瓶中,2.3   药品的发放管理 。

2.3.1   药品储备间负责人根据手术间用药基数补充手术间药 柜,急救车的用药,记录药品发放名称,种类,剂量,时间。

2.3.2   夜间备用一定基数的毒麻、精神药品,专柜加锁,由 值班麻醉生和药品储备间负责人共同清点、签名并上锁, 第二天共同清点基数交接并记录。

2.3.3   发放药品时严格按照药品先期先发先用,既能符合手 术需求,又能加快药品的更新换代,保证手术用药的安全 性和医疗质量。

2.4   药品的核查管理

2.4.1   药品质控监察 手术室应有对整个科室药品储存和使用的监察制度,由 科主任、护士长及有丰富经验的高年资医护人员成立药品管 理监查指导小组,主要负责对药品的安全摆放及安全使用的 监督和检查 [2],每月检查。

2.4.2   严格执行查对制度 “三查五对”,三查既备药时查、给药时查、给药后查,五对既核对药品名称、剂量、浓度、保质期和用途。手术中给药 执行口头医嘱,护士执行时必须与下医嘱的医生再次核实, 口述一遍无误后方可给药。

2.4.3   定期检查 药品储备间管理人员负责药品质量检查及药品整理工 作,每周对手术室药品全面检查,各药品按照先期先用的原 则摆放,并及时将过期、变质、损坏的药品清理出药品间。

用乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取 1.0mL、2.0mL、 4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL,分别置 20mL 容量瓶中,用乙 醇稀释至刻度,摇匀,得到系列标准溶液。按照“2.2.1”项下 条件测定吸光度,并以吸光度(Y)对其浓度(X)进行线性回 归,得到线性方程为 Y=0.035X-0.003,r=0.9999(n=6),结果 表明奥硝唑浓度在2.08μg·mL -1~20.76μg·mL -1 范围内与吸 光度存在较好线性关系。

2.2.4   精密度试验 取“2.2.3”项浓度高的对照品溶液,重复测定 6 次吸 光度,RSD=0.84%(n=6),表明本仪器精密度良好。

2.2.5   重复性试验 取 同 一 批 号 样 品(批 号 160404),按“2.2.2”项 平 行 制备6 份供试品溶液,分别测定含量,结果奥硝唑含量的 RSD=0.68%(n=6),表明本含量测定方法重复性较好。

2.2.6   稳定性试验 取同一批号样品(批号 160404),按“2.2.2”项制备供试 品溶液,分别于 0h、2h、4h、6h、8h 进样,记录吸光度,结果吸光 度的 RSD 为 0.92%(n=5),表明溶液在 8h 内有良好的稳定性。 2.1.8   回收率试验 分别称取奥硝唑对照品 20mg、25mg、30mg 各三份,精密称 定,加入空白辅料混合均匀,置 100mL 容量瓶中,加乙醇 75mL, 振摇使奥硝唑溶解,加乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取 续滤液 2mL,置另一 50mL 量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,作 为供试品溶液。同法测定,按外标法计算回收率。

 讨论

通过本文结果可见,液相色谱法奥硝唑含量低于紫 外分光光度法(P<0.05),考虑到液相色谱法通过色谱柱 的分离作用,将奥硝唑制备过程中的有关物质、杂质等干扰 分离,而紫外分光光度采用直接测定方式,故液相法测 定结果相对更为准确。综上所述,液相色谱法及紫外分 光光度法测定奥硝唑含量的方法在线性、精密度、重复性、稳 定性、回收率试验均符合要求,但液相色谱法分离效果 好,线性范围更宽,建议考虑此种方式来测定奥硝唑片中奥 硝唑含量。



 

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