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浅论紫外分光光度计的性能及维护
发布时间:2018-11-19 点击次数:296次

紫外— 可见分光光度计在工农业各个部门和科学研究的各个领域广泛使用 ,成为人们从事 生产和科研的有力测试手段 ,紫外分光光度计选择性好评、灵敏度高、准确度高、适用范围广 ,分析成本 低、操作简便快速 ,分光光度计成为分析人员最有用的工具之一。 那么在使用分光光度计的过程中对各 项性能指标逐项进行检查、校正 ,以保证其较高的精密度和准确度分析要求显得至关重要。 

对于分析工作者 ,要懂得仪器的日常维护和对 主要技术指标的简易测试方法 ,要经常对仪器各项 性能指标逐项进行检查、校正 ,进行维护和测试 ,以 保证仪器工作在状态。 下面介绍紫外— 可见分 光光度计的主要性能指标及其测试方法。

1 波长校正 由于波长误差可以使定量分析造成误差 ,可以 使定性分析或结构分析判断错误 ,以致于得出错误 结论 ,所以 ,在仪器安装完毕后要进行波长检查 ,在 使用一般时间后也要进行检查和校正 ,保证仪器的 最大灵敏度。波长的测试有粗测和细测 ,粗测方法是 调仪器波长旋纽至 580nm处 ,打开遮光板 ,在比色 槽中光路经过处放一白纸条 ,观察是否有均匀的黄 光。细测方法常用谱钕滤光片校正法 ,可用镨钕滤光 片在 529nm± 1~ 2nm处有较好的吸收峰。 在校正 时 ,将仪器按要求预热 ,波长度盘置 580nm处 , T% 调至最大 ,在比色杯处放一白纸条 ,观察是否有光强 均匀、边缘无光晕或杂光的光斑 ,如不符合要求 ,可 调节灯泡位置使其符合要求 ,是为波长校正的粗调。 再把 灵敏度置于 “ 1” (最低档 ) , 波长度 盘对准 529nm,电表机械零点为零 ,在光路空白时调 T%为 100% T,并反复查零点和 100% T稳定情况。将谱钕 滤光片插入光路 ,慢慢旋转波长度盘 ,找到透光率最 低的一点 ,这一点即为波长 529nm。检查波长度盘的 指示值是不是 529nm,超出规定 (± 1nm)必须进行 调整。

2 杂散光检查 杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机 械零件表面的漫反射形成的。在吸光度测定中 ,杂散 光是分析样品的非吸收光 ,随着样品浓度的增加 ,杂 散光的影响也随之增大 ,将给分析结果带来一定的 误差。因此 ,杂散光的大小也是仪器性能的一项重要 指标。 杂光的来源有: ①仪器本身的原因 ,如单色器的设计、光源的光谱分布、光学原件的老化程度、波 带宽度以及仪器内部的反射及散射等;②室内光线 过强而漏入仪器 ,仪器暗室盖不严;③样品本身的原 因 ,如样品有无荧光、样品的散射能力强弱等。 镨钕 滤光片在 585nm处吸光度 A最大 ,透光率 T最小 ,所 产生的透光与杂光成正比 ,因此可用其透光率表示 杂光的大小。先用谱钕滤片校正波长 ,然后用黑纸片 挡住比色杯光路之后调整 0% T,再用空气做空白调 100% T。插入谱钕滤光片 ,在 585nm处测定 ,其测定 值为杂光水平。

3 线性检查 仪器的光度线性范围 ,也就是仪器工作范 围 ,在此线性范围内测得的物质的吸光系数是一个 常数 ,光度线性范围的检查法是将物质 (例如重铬酸 钾等 )配成一系列不同浓度 ,测定吸光度 ,根据测得 的吸光度计算吸光系数— 吸光度曲线 ,曲线上的平 坦区域即为仪器的线性范围。

4 比色皿的配对 比色皿一般由玻璃、石英或荧石制成 ,光径 1. 0 或 0. 5cm,光线通过时有一部分光为空气与玻璃接 触面的反射而损失 ( 4% ) ,另一部分 (很少 )为玻璃吸 收 ,在使用之前 ,要进行质量检查进行配对 ,通常 Tmax%~ Tmin% ≤ 0. 5%为合格比色皿配套。 方法是: ①选取几支大小、材质、色泽相同的比 色皿 ,洗净 ,装入占比色皿体积 2 /3 的蒸馏水 ( D. W. ) ,擦干 ,放入比色槽。②在 585nm处 ,调第 1支比 色皿透光度为 100% T,依次测出其他几支比色皿的 T% 。 不合格的需反复剔除极端值 ,或重新配对 ,直 至有 2个以上的比色皿合格。

5 分辨率的检查 分光光度计的分辨率是指仪器对于紧密相邻的 峰 (吸收或发射 )可分辨的最小波长间隔 ,是衡量分 光光度计性能的重要指标之一 ,它是分光光度计质量的综合反映 ,单色器输出的单色的光谱纯度 ,强度 以及检测器的光谱灵敏度等是影响仪器分辨率的主 要因素。分辨率低有时会使相邻两峰不能分开 ,使定 性分析或结构测定造成错误 ,分光光度法的定量分 析的基础是比耳定律 ,严格来说 ,吸光度与浓度成线 性关系只能对单色光而言 ,单色性差就会使定量分 析结果产生误差 ,对于双光束紫外及可见分光光度 计在 260nm处 ,仪器应能分辨波长间隔为 0. 3nm的 二条谱线 ,其检查方法是: 将仪器量程放在 0~ 100% 档;将 1~ 2滴苯液滴入 1cm石英吸收池中 ,盖上盖 子 ,放入样品室内;调节 100% T旋钮 ,使 270nm处的 透射率调到 90~ 100% 之间 ,然后扫描 258. 9nm的 一组苯蒸气吸收峰;在记录纸上观察 258. 9nm的分 辨深度 ,如果 A值大于 8% ,说明仪器分辨率优于 0. 3nm。 6 重复性检查 在同样条件下对某一试样进行多次重复测量吸 光度 ,求得各次测量值对平均值的偏差和偏差的平 均值。

7 灵敏度检查 将重铬酸钾液配制成 30和 32. 5mg铬 /L及 120 和 122. 5mg /L铬的 4种应用液 (浓度差两组各为 2. 5mg /L铬 ) 波长 440nm,以水校零点 ,将上述应用 液连续测 3次吸光度 ,两组 2. 5mg /L铬浓度差的吸 光度值差都不小于 0. 01为合格。 8 基线的平直性 是指不放置样品时 ,扫描 T为 100%线和 T为 0 时 ,基线倾斜或弯曲的程度。 如果基线的平直性差 , 就会使样品的吸收光谱中各吸收峰之间的比值发生 变化 ,给定性分析造成错误。导致基线不平直的主要 原因是仪器的光学系统失调 ,两光束不平衡。如仪器 受震 ,光源位置变动等都会引起光学系统故障。


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