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紫外分光光度计法测定人参须根中总炔醇的含量
时间:2018-11-20 点击次数:657

提出人参须根中总炔醇的含量测定方法。采用紫外分光光度计法测定,对照品为 人参炔醇,检测波长为 230 nm。结果表明: 人参炔醇在 0. 043 ~ 0. 215 g·L - 1 ,线性关系良好, r = 0. 999 9,平均回收率与 RSD 分别为 98. 7% 和 1. 6% 。该方法快速简便、重复性好,可用于人 参须根中总炔醇的含量测定。

人参系五加科植物 Panax ginseng C. A. Mey 的 干燥根,具有大补元气、生津止渴、安神益智的功 效,为名贵中药品种[1],其主要化学成分有人参皂 苷、多糖、甾醇、挥发油、氨基酸等,此外尚含一种 聚乙炔醇成分,虽然含量极低,但具有重要的神经 组织保护作用和抗癌活性,研究价值[2 - 4]。 并测得含量为 0. 030% ; 1987 年,北川勋[6]鉴 定出人参环氧炔醇,并测得含量为 0. 044% ; 随后 逐渐鉴定出其他聚乙炔醇化合物。目前得到结构 确证的有 10 余种,如表 1 所示。多年来,人们对 聚乙炔醇成分的研究集中于单体成分的鉴别及测 定,未见对总炔醇含量的测定研究。本文以人参 须根为研究对象,选择人参炔醇为对照品,提出了 人参须根中总炔醇的紫外分光光度计测定方法, 探索有效部位含量,为人参须根的综合开发利用 提供依据。

1 仪器与试药 UV1901PC(奥析科学仪器有限公司); KQ-500DB 型数控超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公 司) ; RE-52A 型旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器 厂) ; TB-215D 型电子天平( 北京赛多利斯仪器系 统有限公司) 。 人参须根购于吉林参茸有限责任公司,经重 庆理工大学药学与生物工程学院傅善权副主任技 师鉴定为实。 人参炔醇对照品,重庆理工大学药学与生物 工程学院制备,批号为 100410,经 HPLC 归一化测 定含量不低于 98% 。所用试剂均为市售分析纯。 2 方法和结果 2. 1 对照品母液的制备 精密称取人参炔醇 4. 30 mg 于 10 mL 容量瓶 内,甲醇定容,制成 0. 43 g /L 的对照品母液,备用。 2. 2 样品的提取与分离 取经 干 燥 粉 碎 过 60 目筛的人参须根粉末 1. 0 kg,加入 10 倍药材量的沸程为 60 ~ 90 ℃ 的石 油醚回流提取 1 h,提取 3 次,合并滤液,减压浓 缩,得粗提物。将粗提物经硅胶柱层析分离,洗脱 剂体积比为石油醚∶ 乙酸乙酯 = 10∶ 1,对炔醇成分 进行分段收集,合并流分,55 ℃ 减压浓缩,得红棕 色油状物 1. 127 6 g。对总炔醇进行 TLC 检查, 10% 硫酸乙醇显色,结果呈黑褐色。 2. 3 供试品溶液的制备 精密称取人参炔醇13. 10 mg 于50 mL 容量瓶 内,甲醇定容,制成 0. 262 g /L 的供试品溶液,摇 匀,备用。 2. 4 测定波长的选择 精密吸取对照品母液 2. 0 mL,置 5 mL 容量瓶 中,甲醇定容,摇匀,作为对照品溶液。同时取供试品溶液,以相应试剂为空白,立即在紫外分光光 度计于 190 ~ 500 nm 扫描。对照品与供试品的 大吸收波长均在 230 nm,因此选取 230 nm 作为检 测波长。 2. 5 线性关系考察 分别精密量取本文 2. 1 节制得的对照品母液 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5 mL 于 5 mL 容量瓶内,甲醇 定容,摇匀,以相应试剂为空白,用紫外分光光度 计在 230 nm 处测定吸光度,以质量浓度( g /L) 为 横坐标,吸光度( A) 为纵坐标,绘制标准曲线。经线 性回归分析处理得回归方程为: A = 4. 011 6C + 0. 008 3( r =0. 999 9) 。结果表明吸光度与对照品浓 度在 0. 043 ~0. 215 g /L 呈良好线性关系。 2. 6 精密度实验 精密 吸 取 本 文 2. 1 节制得的对照品母液 2. 0 mL,置 5 mL 容量瓶中,甲醇定容,摇匀,230 nm 下测定吸光度,结果 RSD 为 0. 5% ,表明仪器 精密度良好。

2. 7 稳定性实验 取本文 2. 3 节制得的试品溶液,分别在 0、2、 4、8、16 h 测定吸光度,结果 RSD 为 0. 7% ,表明供 试品溶液在 16 h 内稳定。 2. 8 重复性实验 取本文 2. 2 节制得的总炔醇样品,按本文 2. 3 节的方法制备 6 份,分别测定吸光度,结果 RSD 为 0. 9% ,表明该方法的重复性较好。 2. 9 回收率实验 取已知含量的总炔醇样品 6 份,2 份为 1 组, 分别按高、中、低浓度加入人参炔醇对照品,按本 文 2. 3 节的方法制备,测定吸光度,吸光度均在本 文 2. 5 所述的线性范围内。计算人参炔醇平均回 收率与 RSD 分别为 98. 7% 和 1. 6% ,加样回收率 计算公式如式( 1) 所示,结果表明该方法准确度较 好( 见表 2) 。 回收率( % ) = ( 测得量 - 样品已知含量) /加 入对照品量 × 100%。

2. 10 样品含量测定 取 3 批人参须根药材各 100 g,按本文 2. 2 节 的方法制备总炔醇样品,按本文 2. 3 节的方法制 备成供试品溶液,在 230 nm 下测定吸收值,由线 性方程计算 3 批总炔醇样品中总炔醇含量,并由 此计算出药材中总炔醇含量。

3 讨论 本实验曾采用乙醇、乙酸乙酯和石油醚回流 提取,结果显示乙醇和乙酸乙酯提取杂质较多,而 采用石油醚提取可以除去大量强极性及中极性杂 质,大大简化了后续分离过程,并通过正交优化得 到工艺,方法提取率高,是一种理想的聚乙炔 醇提取方法。 分离过程中考察了不同洗脱剂( 石油醚 - 、石油醚 - 乙酸乙酯、石油醚 - 环己烷等) ,洗脱 剂比例以及流速因素对分离效率的影响,终选 定的洗脱剂的体积比为石油醚∶ 乙酸乙酯 = 10∶ 1, 分离度较好,且毒性较小,经过一次柱层析就能得 到较高纯度的总炔醇,远远高于国家规定 50% 的 要求,适于工业化生产。 人参为名贵中药,对皂苷类主要成分的研究 已较为深入,但对聚乙炔醇的研究较少,对人参须 根中聚乙炔醇的含量测定还未见报道。本文重点 对人参须根中总炔醇进行了 UV 定量测定,确定了 有效部位含量,并为人参须根的综合开发利用提 供依据。

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