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UV1901PC紫外可见分光光度计测乙酰色氨
时间:2016-03-31 点击次数:1007

UV1901PC紫外可见分光光度计测乙酰色氨测定法

本法系用紫外-可见分光光度法(吸收系数法)测定

人血白蛋白供试品中的乙酰-DL-色氨酸含量。

测定法用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质稀释至

5 % ,即为供试品溶液。量取供试品溶液0.1ml,分别加

人生理氯化钠溶液0. 3ml0. 3mol/L高氯酸溶液3. 6ml

混匀;另取生理氯化钠溶液0.4ml,加0. 3mol/L高氯酸

溶液3. 6 m l ,混匀,作为空白对照。室温放置1 0分钟,

以每分钟3500转离心2 0分钟,取上清液在波长28 0 n m

测定吸光度,用空白溶液调零点。按下式计算供试品中的

乙酰-DL-色氨酸含量:

供试品/V-乙酰-DL-色氨酸含量_ (A2SQ Xn) /5. 25

(mmol/g) P

式中〃为供试品的稀释系数;

5. 2 5N -乙酰-DL-色氨酸的毫摩尔吸收系数;

P 为供试品的蛋白质含量,g/L

3 1 1 3 苯酚测定法

本法系依据溴酸盐溶液与盐酸反应产生溴,遇苯酚生

成三溴苯酚,过量的溴与碘化钾反应释出碘,析出的碘用

硫代硫酸钠滴定液滴定,根据硫代硫酸钠滴定液的消耗

量,可计算出供试品中苯酚的4 量。

测定法精密量取供试品lml,置具塞锥形瓶中,加

50ml,精密加人0. 02mol/L溴溶液(称取溴酸钾

0.56g,加溴化钾3g,加水溶解并稀释至1000ml) 15?

25ml (供试品含苯酚量0_ 3 % ?0 . 5 %时加25ml,小于

0.3%则加15ml),沿瓶壁加人6mol/L盐酸溶液10ml,摇

匀,密塞,在暗处放置30分钟后,加2 5 %碘化钾溶液2ml

于具塞锥形瓶颈口,稍启瓶塞,使流下,密塞,摇匀。以

少量水洗瓶颈,用硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L) 滴定至

近终点时,加淀粉指示液约0.5ml,滴定至蓝色消失,并

将滴定的结果用空白试验校正。

按下式计算:

苯酚含量(%) - (V°~Vl) XcX15. 69X100

式中V。为空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液的体积,ml;

V i 为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液的体积,ml;

c为硫代硫酸钠滴定液的浓度,mol/L;

15. 6 9为苯酚分子量的1/6

【附注】(1 )硫代硫酸钠滴定液(0. lmol/L) 的制备

及标定称取硫代硫酸钠26g与无水碳酸钠0. 20g加新

沸过的冷水适量溶解并稀释至1000ml,摇勻,放置1

月后滤过。取在__________120°C干燥至恒重的基准重铬酸钾0. 15g

精密称定,置碘瓶中,加水50ml溶解,加碘化钾2.0g,

轻轻振摇使溶解,加稀硫酸(5.7— 100) 4 0 m l ,摇匀,密

塞;在暗处放置1 0分钟后,加水250ml稀释,用本液滴

定至近终点时,加淀粉指示液(称取可溶性淀粉0.5g

加水5ml混悬后缓缓倾人100ml沸水中,随加随搅拌,继

续煮沸2 分钟,冷却,倾取上层清液。本液应临用配制)

3 m l ,继续滴定至蓝色消失而显亮绿色,并将滴定的结果

用空白试验校正。每l ml硫代硫酸钠滴定液(0. lmol/L)

相当于4.903mg重铬酸钾。根据本液的消耗量与重铬酸

钾的取用量,算出本液的浓度,即得。

( 2 )硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L) 的制备精密

量取硫代硫酸钠滴定液(0. lmol/L) 100ml, 加水准确稀

释至500ml,摇匀。

( 3 )可做限度测定。

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