0 4 0 1紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法是在190?800mn波长范围内测定

物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当

光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不

同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并

绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从

吸收光谱中，可以确定zui大吸收波长和zui小吸收波，长

Xn,n o物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此/可

以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱

的比较，或通过确定zui大吸收波长，或通过测量两个特定波

长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时，在zui大吸收波长

处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶

液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。

仪器的校正和检定

1 .波长由于$ 境因素对机械部分的影响，仪器的波长

经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正

0 7 2 1维生素A 测定法

本法是用紫外-可见分光光度法（通则0401)或液相

色谱法(通则0512)测定维生素A 及其制剂中维生素A 的含

量，以单位表示，每单位相当于全反式维生素A 醋酸酯

0. 344F g 或全反式维生素A 醇0. 300jug。

测定应在半暗室中尽快进行。

*法（紫外-可见分光光度法）

由于维生素A 制剂中含有稀释用油和维生素A 原料药

中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度

不是维生素A *的吸收。在以下规定的条件下，非维生

素A 物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正，

以便得到正确结果。

校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测

得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器

波长应准确，在测定前，应对仪器波长进行校正。

测定法取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定

量稀释制成每lm l中含9?1 5单位的溶液，照紫外-可见分

光光度法（通则0 4 0 1 ) ,测定其吸收峰的波长，并在下表所

列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长3 2 8 n m处吸

光度的比值和波长3 2 8 n m处的E & 值。

波长/nm 吸光度比值波长/nm 吸光度比值

300 0. 555 340 0. 811

316 0. 907 360 0. 299

328 1.000

如果吸收峰波长在326~329mn之间，且所测得各波长

吸光度比值不超过表中规定的士0. 02, 可用下式计算含量：

每l g 供试品中含有的维生素A 的单位= E£(328mn)X1900

如果吸收波长在326?329mn之间，但所测得的各波

长吸光度比值超过表中规定值的± 0. 02, 应按下式求出校正

后的吸光度，然后再计算含量：

^328 (校正）= 3. 52(2^328 ' — A 316 — A 340 )

如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不

超过± 3 . 0 % ,则不用校正，仍以未经校正的吸光度计算

含量。

如果校正吸光度与未校正吸光度相差在一 15%至一 3%

之间，则以校正吸光度计算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度的一 15%至_ 3%的

范围，或者吸收峰波长不在326?329nm之间，则供试品须

按下述方法测定。

另精密称取供试品适量（约相当于维生素A 总量500单

位以上，重量不多于2 g ) ,置皂化瓶中，加乙醇3 0m l与

50%氢氧化钾溶液3 m l,置水浴中煮沸回流3 0分钟，冷却

后，自冷凝管顶端加水lO ra l冲洗冷凝管内部管壁，将皂化

液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂），皂

化瓶用水60?100ml分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用

不含过氧化物的振摇提取4 次，毎次振摇约5 分钟，第

一次60ml，以后各次4 0 m l,合并液，用水洗涤数次，

每次约1 0 0m l,洗涤应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇酚

酞指示液不再显红色，液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的

滤器滤过，滤器用洗涤，洗液与液合并，置250ml

量瓶中，用稀释至刻度，摇匀；精密量取适量，置蒸发

皿内，微温挥去，迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每

lm l中含维生素A 9?15单位，照紫外-可见分光光度法(通则

0401) , 在 300nm、310nm、325nm 与 334nm 四个波长处测定

吸光度，并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在323?

327nm之间，且300mn波长处的吸光度与325nm波长处的吸

光度的比值应不超过0 .7 3 ,按下式计算校正吸光度：

A 325 (校正）= 6. 81325 — 2_ 553io — 4. 260A334

每l g 供试品中含有的维生素A 的单位= £；丨11(3251^1,

校正）X 1830

如果校正吸光度在未校正吸光度的97%~ 103%之间，

则仍以未经校正的吸光度计算含量。

如果吸收峰的波长不在323?327nm之间，或300nm波

长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值超过0.73,

则应自上述皂化后的提取液250ml中，另精密量取适量

(相当于维生素A 300?400单位），微温挥去至约剩

5 m l,再在氮气流下吹干，立即精密加人甲醇3 m l ,溶解后，

采用维生素D 测定法（通则0722)第二法项下的净化用色谱

系统，精密量取溶解后溶液5 0 ( ^ 1 ,注入液相色谱仪，分离

并准确收集含有维生素A 的流出液，在氮气流下吹干，而

后照上述方法自“迅速加异丙醇溶解” 起，依法操作并计算

含量。