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紫外可见分光光度计测维生素A
时间:2016-08-16 点击次数:1552

0 4 0 1紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法是在190?800mn波长范围内测定

物质的吸光度,用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当

光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不

同而变化。因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度,并

绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从

吸收光谱中,可以确定zui大吸收波长和zui小吸收波,长

Xn,n o物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此/

以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱

的比较,或通过确定zui大吸收波长,或通过测量两个特定波

长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时,在zui大吸收波长

处测量一定浓度样品溶液的吸光度,并与一定浓度的对照溶

液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。

仪器的校正和检定

1 .波长由于$ 境因素对机械部分的影响,仪器的波长

经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校正

0 7 2 1维生素A 测定法

本法是用紫外-可见分光光度法(通则0401)或液相

色谱法(通则0512)测定维生素A 及其制剂中维生素A 的含

量,以单位表示,每单位相当于全反式维生素A 醋酸酯

0. 344F g 或全反式维生素A 0. 300jug

测定应在半暗室中尽快进行。

*法(紫外-可见分光光度法)

由于维生素A 制剂中含有稀释用油和维生素A 原料药

中混有其他杂质,采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度

不是维生素A 独有的吸收。在以下规定的条件下,非维生

A 物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正,

以便得到正确结果。

校正公式采用三点法,除其中一点是在吸收峰波长处测

得外,其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定,因此仪器

波长应准确,在测定前,应对仪器波长进行校正。

测定法取供试品适量,精密称定,加环己烷溶解并定

量稀释制成每lm l中含9?1 5单位的溶液,照紫外-可见分

光光度法(通则0 4 0 1 ) ,测定其吸收峰的波长,并在下表所

列各波长处测定吸光度,计算各吸光度与波长3 2 8 n m处吸

光度的比值和波长3 2 8 n m处的E & 值。

波长/nm 吸光度比值波长/nm 吸光度比值

300 0. 555 340 0. 811

316 0. 907 360 0. 299

328 1.000

如果吸收峰波长在326~329mn之间,且所测得各波长

吸光度比值不超过表中规定的士0. 02, 可用下式计算含量:

l g 供试品中含有的维生素A 的单位= E£(328mn)X1900

如果吸收波长在326?329mn之间,但所测得的各波

长吸光度比值超过表中规定值的± 0. 02, 应按下式求出校正

后的吸光度,然后再计算含量:

^328 (校正)= 3. 52(2^328 ' A 316 A 340 )

如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不

超过± 3 . 0 % ,则不用校正,仍以未经校正的吸光度计算

含量。

如果校正吸光度与未校正吸光度相差在一 15%至一 3%

之间,则以校正吸光度计算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度的一 15%_ 3%

范围,或者吸收峰波长不在326?329nm之间,则供试品须

按下述方法测定。

另精密称取供试品适量(约相当于维生素A 总量500

位以上,重量不多于2 g ) ,置皂化瓶中,加乙醇3 0m l

50%氢氧化钾溶液3 m l,置水浴中煮沸回流3 0分钟,冷却

后,自冷凝管顶端加水lO ra l冲洗冷凝管内部管壁,将皂化

液移至分液漏斗中(分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂),皂

化瓶用水60?100ml分数次洗涤,洗液并入分液漏斗中,用

不含过氧化物的振摇提取4 次,毎次振摇约5 分钟,第

一次60ml,以后各次4 0 m l,合并液,用水洗涤数次,

每次约1 0 0m l,洗涤应缓缓旋动,避免乳化,直至水层遇酚

酞指示液不再显红色,液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的

滤器滤过,滤器用洗涤,洗液与液合并,置250ml

量瓶中,用稀释至刻度,摇匀;精密量取适量,置蒸发

皿内,微温挥去,迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每

lm l中含维生素A 9?15单位,照紫外-可见分光光度法(通则

0401) , 300nm310nm325nm 334nm 四个波长处测定

吸光度,并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在323?

327nm之间,且300mn波长处的吸光度与325nm波长处的吸

光度的比值应不超过0 .7 3 ,按下式计算校正吸光度:

A 325 (校正)= 6. 81325 2_ 553io 4. 260A334

l g 供试品中含有的维生素A 的单位= £;丨11(3251^1,

校正)X 1830

如果校正吸光度在未校正吸光度的97%~ 103%之间,

则仍以未经校正的吸光度计算含量。

如果吸收峰的波长不在323?327nm之间,或300nm

长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值超过0.73,

则应自上述皂化后的提取液250ml中,另精密量取适量

(相当于维生素A 300?400单位),微温挥去至约剩

5 m l,再在氮气流下吹干,立即精密加人甲醇3 m l ,溶解后,

采用维生素D 测定法(通则0722)第二法项下的净化用色谱

系统,精密量取溶解后溶液5 0 ( ^ 1 ,注入液相色谱仪,分离

并准确收集含有维生素A 的流出液,在氮气流下吹干,而

后照上述方法自“迅速加异丙醇溶解” 起,依法操作并计算

含量。

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