第二法福林酚法(1^ * 17法>

本法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与

C u 2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼

酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在

一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对

照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的

含童。

本法灵敏度高，测定范围为20.25C^ g。但对本法产生

干扰的物质较多，对双缩脲反应产生干扰的离子，同样容易

干扰福林酚反应，且影响更大。如还原物质、酚类、枸橼

酸、硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸、糖类、甘

油等均有干扰作用。

除另有规定外，按方法1操作；如有干扰物质时，除另

有规定外，按方法2操作并需经方法学验证。

方法1:

试剂碱性铜试液取氢氧化钠I0 g，碳酸钠50g，加

水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml

使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混

合作为乙液。临用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。

对照品溶液的制备除另有规定外，取血清白蛋白（牛）

对照品或蛋白质含量测定国家标准品，加水溶解并制成每

lm l中含0. 2mg的溶液。

供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备（蛋

白质浓度应与对照品溶液基本一致）。

测定法精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、

0. 6mK 0.8ml、1. Oml(对照品溶液取用量可在本法测定范

围内进行适当调整），分别置具塞试管中，各加水至l.Otnl,

再分别加入碱性铜试液1 .0 m l,摇匀，室温放置1 0分钟，

各加人福林酚试液[ 取福林试液中的贮备液（2m o l/L酸浓

度）1—16] 4 .0 m l,立即混匀，室温放置3 0分钟，照紫外-

可见分光光度法（通则0401)，在650mn的波长处测定吸光

度；同时以0 号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应

的吸光度计算线性回归方程。另精密量取供试品溶液适量，

同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓

度，并乘以稀释倍数，即得。