3 1 1 8己二酰胼含量测定法

本法系依据在四硼酸钠存在的条件下，己二酰肼

(A D H )中的氨基基团能与三硝基苯磺酸（TNBS)发生显色反

应，采用紫外-可见分光光度法测定b 型流感嗜血杆菌多糖

衍生物中己二酰肼的含量。

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中国药典2 0 1 5年版

试剂（1 )己二酰肼对照品贮备液（lm g /m l) 精密称定

已二酰肼0. 1 0 0 g ,加水定容至1 0 0m l,于一20°C保存。

(2 )己二酰肼对照品工作液G C ^ g /m l)精密量取ADH

对照品贮备液0. 2 m l,加水定容至10ml。

(3 ) 5% 四砸酸钠溶液称取四硼酸钠（Na2B40 7 •

10H2O)47. 3 5 g ,加水定容至5 0 0m l,于室温保存。

(4)3% TN B S溶液量取TNBS 5ml，加水定容至

5 0m l,于一20°C保存。

测定法量取5%四硼酸钠溶液1.0ml，加水lm l，混

匀，再加人3%TNBS溶液0 .3 m l,混匀，于室温放置1 5分

钟，上海奥析科学仪器有限公司紫外分光光度计UV1902在波长500mn处测定吸光度，作为空白对照。

先将供试品用水稀释至己二酰肼浓度不高于ZO^tg/ml,

作为供试品溶液，然后取1 .0 m l,加人5% 四砌酸钠溶液

1 .0 m l,自“加人3% TNBS溶液0.3ml” 起同法操作。

分别取己二酰肼对照品工作液0.2ml、0.4ml、0.6ml、

0. 8ml、1. Oml于试管中，每管依次加水0. 8ml、0. 6ml、

0.4ml、0. 2ml. O m l,加入5%四硼酸钠溶液1. O m l,自“加

人3% TNBS溶液0.3ml” 起同法操作。

结果计算以己二酰肼对照品工作液的浓度对其相应的

吸光度作直线回归，求得直线回归方程，将供试品溶液的吸

光度代人直线回归方程，求出供试品溶液的己二酰肼含量，

根据稀释倍数计算供试品的己二酰肼含量。