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上海奥析科学仪器紫外可见分光光度计UV1901PC测磷
时间:2016-09-09 点击次数:890

高分子结合物含置测定法

本法系利用高分子结合物、低分子结合物及游离多糖在

不同乙醇浓度下,沉淀分离,采用紫外-可见分光光度法测

定磷含量,计算髙分子结合物的含量。

试剂 1) 5m o l/L氣化钠溶液精密称定氯化钠

2 9 .2 2 g ,加水溶解并稀释至1 0 0m l,室温保存。

(2 )1 .5m o l/L硫酸于1体积98%的硫酸中加人1 1

积的水,混匀。

(3)2. 5%钼酸铵称取钼酸铵2. 65g, 加水溶解并稀释

100mlo

(4)10%抗坏血酸称取抗坏血酸10g, 加水溶解并稀

释至100ml

(5 )矿化试剂硫酸与70%高氯酸等体积混合制得。

( 6 )产色试剂水、1 .5m o l/L硫酸、2 .5% 钼酸铵、

10%抗坏血酸,按2 : 1 : 1 : 1体积比混合配制.

(7)8(Vg/ml磷对照品贮备液精密称定经100°C干燥的

磷酸氢二钠0. 3665g或磷酸二氢钾0 .3 5 0 9 g ,加水500ml

5mol/L硫酸溶液10ml溶解,补加水至1000ml。临用时,将

贮备液做20倍稀释,即为磷对照品工作液。

(8 )1 .0m o l/L氢氧化钠溶液称取4 g氢氧化钠,加水

溶解并稀释至100ml

供试品溶液的制备(1)分步沉淀原液用生理氯化钠

溶液稀释至多糖含量20?2 8 ^ 7 ^ 1或成品疫苗3ml,加人

3120 人血液制品中糖及糖醇测定法

5m o l/L氯化钠溶液0. 7 5 m l,混匀后加人无水乙酵15ml,于

20X;冰箱放置72?96小时,以每分钟8000 ^ 4X:离心90

分钟,吸取上清液为供试品溶液2 ; 于沉淀中加人50%乙醇

溶液0 .5 m l,加玻璃珠,混合后室温放置1 小时;再加人

50%乙醇溶液1.5ml,混合后室温放置2 小时,然后以每分

80008°C离心1小时,吸取1. 8m l上清液为供试品溶液

3 ; 沉淀再加人l.O m o l/L氢氧化钠溶液0.5ml, 混合后室温

放置1小时,加水1.25ml,作为供试品溶液4

(2)取多糖含量20?28Mg /m l的原液或成品疫苗1. Oml

为供试品1

(3 )供试品溶液的矿化分别量取1 .0m l供试品1

1 .5m l供试品溶液20 .7m l供试品溶液30 .5m l供试品溶

4 2 份;分别加人矿化试剂0. 1 5 m l,150°C干燥1

时,然后升温至180X:干燥3 0分钟,再升温至250°C干燥1

小时。

测定法量取水1 .9 5 m l,加矿化试剂50^1后加2.0ml

产色试剂,混匀后置37T:水浴2 小时,在波长8 2 5 m n处测

定吸光度,作为空白对照。

于矿化好的供试品溶液中加水1.85ml,加产色试剂

2.0ml,混匀后置37TC水浴2 小时,在波长825nm处测定吸

光度。

分别量取磷对照品工作液0. 1ml0. 2ml0. 4ml

0.8ml1 .0m l于试管中,每管依次加水1. 85ml1.75ml

1.55ml1.15ml0. 95ml;然后每管分别加入矿化试剂

5 0 f i l后加2. Oml产色试剂,混匀后置37°C水浴2 小时,在

波长825nm处测定吸光度。

结果计算以磷对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作

直线回归,求得直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代人

直线回归方程,求出磷含量。

供试品磷含量(Fg /tn l)分别为:

P ^ C A j X S ) / ! . 0

P2 = CA2 X 18. 75)/l. 5

P3 = (A3X2. 0)/0. 7

P4 = (A t X 2. 0)/0. 5 - (P s X10)/100

试验有效性8 0% </ ( 2+ + 尺)<120%

供试品高分子结合物含量(%) = P 4/ ( + P 3 + P , ) X 100

供试品游离多糖含量( ) = [1 / (P2 + P 3 + P 4) ] X 100

式中 f V P2, P3P4 为供试品1,供试品溶液2

供试品溶液3 , 供试品溶液4 的磷含量;A A 2A 3A,

为供试品1 , 供试品2 , 供试品3 , 供试品4 中取样矿化后的

磷含量。

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