高分子结合物含置测定法

本法系利用高分子结合物、低分子结合物及游离多糖在

不同乙醇浓度下，沉淀分离，采用紫外-可见分光光度法测

定磷含量，计算髙分子结合物的含量。

试剂 （1) 5m o l/L氣化钠溶液精密称定氯化钠

2 9 .2 2 g ,加水溶解并稀释至1 0 0m l,室温保存。

(2 )1 .5m o l/L硫酸于1体积98%的硫酸中加人1 1体

积的水，混匀。

(3)2. 5%钼酸铵称取钼酸铵2. 65g, 加水溶解并稀释

至 100mlo

(4)10%抗坏血酸称取抗坏血酸10g, 加水溶解并稀

释至100ml。

(5 )矿化试剂硫酸与70%高氯酸等体积混合制得。

( 6 )产色试剂水、1 .5m o l/L硫酸、2 .5% 钼酸铵、

10%抗坏血酸，按2 : 1 : 1 : 1体积比混合配制.

(7)8(Vg/ml磷对照品贮备液精密称定经100°C干燥的

磷酸氢二钠0. 3665g或磷酸二氢钾0 .3 5 0 9 g ,加水500ml、

5mol/L硫酸溶液10ml溶解，补加水至1000ml。临用时，将

贮备液做20倍稀释，即为磷对照品工作液。

(8 )1 .0m o l/L氢氧化钠溶液称取4 g氢氧化钠，加水

溶解并稀释至100ml。

供试品溶液的制备（1)分步沉淀原液用生理氯化钠

溶液稀释至多糖含量20?2 8 ^ 7 ^ 1或成品疫苗3ml，加人

3120 人血液制品中糖及糖醇测定法

5m o l/L氯化钠溶液0. 7 5 m l,混匀后加人无水乙酵15ml，于

一20X；冰箱放置72?96小时，以每分钟8000 ^ 4X：离心90

分钟，吸取上清液为供试品溶液2 ; 于沉淀中加人50%乙醇

溶液0 .5 m l,加玻璃珠，混合后室温放置1 小时；再加人

50%乙醇溶液1.5ml，混合后室温放置2 小时，然后以每分

钟8000转8°C离心1小时，吸取1. 8m l上清液为供试品溶液

3 ; 沉淀再加人l.O m o l/L氢氧化钠溶液0.5ml, 混合后室温

放置1小时，加水1.25ml，作为供试品溶液4。

(2)取多糖含量20?28Mg /m l的原液或成品疫苗1. Oml

为供试品1。

(3 )供试品溶液的矿化分别量取1 .0m l供试品1、

1 .5m l供试品溶液2、0 .7m l供试品溶液3、0 .5m l供试品溶

液4 各2 份；分别加人矿化试剂0. 1 5 m l,置150°C干燥1小

时，然后升温至180X：干燥3 0分钟，再升温至250°C干燥1

小时。

测定法量取水1 .9 5 m l,加矿化试剂50^1后加2.0ml

产色试剂，混匀后置37T：水浴2 小时，在波长8 2 5 m n处测

定吸光度，作为空白对照。

于矿化好的供试品溶液中加水1.85ml，加产色试剂

2.0ml，混匀后置37TC水浴2 小时，在波长825nm处测定吸

光度。

分别量取磷对照品工作液0. 1ml、0. 2ml、0. 4ml、

0.8ml、1 .0m l于试管中，每管依次加水1. 85ml、1.75ml、

1.55ml、1.15ml、0. 95ml；然后每管分别加入矿化试剂

5 0 f i l后加2. Oml产色试剂，混匀后置37°C水浴2 小时，在

波长825nm处测定吸光度。

结果计算以磷对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作

直线回归，求得直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代人

直线回归方程，求出磷含量。

供试品磷含量(Fg /tn l)分别为：

P ^ C A j X S ) / ! . 0

P2 = CA2 X 18. 75)/l. 5

P3 = (A3X2. 0)/0. 7

P4 = (A t X 2. 0)/0. 5 - (P s X10)/100

试验有效性8 0% <朽/ ( 尸2+ 朽+ 尺）<120%

供试品高分子结合物含量（％) = P 4/ ( 朽+ P 3 + P , ) X 100

供试品游离多糖含量(％ ) = [1 — / (P2 + P 3 + P 4) ] X 100

式中 f V P2, P3、P4 为供试品1，供试品溶液2，

供试品溶液3 , 供试品溶液4 的磷含量；A 、A 2、A 3、A,

为供试品1 , 供试品2 , 供试品3 , 供试品4 中取样矿化后的

磷含量。