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紫外可见分光光度计测得门冬酰胺酶活力含量过程方法
时间:2016-11-01 点击次数:782

紫外可见分光光度计测得门冬酰胺酶活力含量过程方法 

 

酶活力对照品溶液的制备取经105T

干燥至恒重的硫酸铵适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制

0. 0015mol/L的溶液。

供试品溶液的制备取本品约O . lg ,精密称定,加磷酸

盐缓冲液(取0. lm o l/L磷酸氢二钠溶液适量,用0. lmol/L

磷酸二氢钠溶液调节p H 值至8.0)溶解并定量稀释制成每

lm l中约含5 单位的溶液。

测定法取试管3 支(14Cm X l . 2cm),各加人用上述磷

酸盐缓冲液配制的0. 33%门冬酰胺溶液1.9ml,371C水浴

中预热3分钟,分别于*管U ) 中加人25% 三氯醋酸溶液

0. 5ml,第23 管⑴中各精密加人供试品溶液0. lm l ,37T

水浴中,准确反应15分钟,立即于*管U )中精密加入供试

品溶液0.1m l,23 管(《) 中各加人25% 三氣醋酸溶液

0.5ml,摇匀,分别作为空白反应液(t。)和反应液(i )。精密量

h t 和对照品溶液各0. 5ml,置试管中,各加水7. 0ml与碘

化汞钾溶液(取碘化gong23g、碘化钾16g,加水至100ml,临用前

20%氢氧化钠溶液等体积混合)1. 0ml,混匀,另取试管一

支,加水7. 5ml与碘化gong钾溶液1. 0ml作为空白对照管,室温

放置15分钟,照紫外可见分光光度计法(通则0401),在450nra

的波长处分别测定fo吸光度A。、t 吸光度A ,和对照品溶液吸

光度As,A ,的平均值,按下式计算:

效价(单双形「(早位仅//mmgg)) = ( AAS°X)X5X量稀(释mg) ^

式中5 为反应常数;

F 为对照品溶液浓度的校正值。

效价单位定义:在上述条件下,一个门冬酰胺酶单位相当

于每分钟分解门冬酰胺产生Ipmol氨所需的酶量。

蛋白质含量取本品约20mg,精密称定,照蛋白质含量

测定法(通则0731*法)测定,即得。

比活由测得的效价和蛋白质含量计算每lm g蛋白中

含门冬酰胺酶活力的单位数。

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