UV1901PC紫外分光光度计测多巴胺含量

UV1901PC紫外分光光度计测多巴胺含量的原理是根据多巴胺与亚硝酸钠在pH5.90时的反应产物在300nm处有zui大吸收,多巴胺质量浓度在0~10LgPmL范围内与吸光度之间遵从朗伯比尔定律,表观摩尔吸光系数为1.85@104L#mol-1#cm-1,检测限为0.1LgPmL。

多巴胺是一种神经传递物质,在体内是合成去甲肾上腺素的直接前体,具有重要的生理作用。作为药物,能增强心肌收缩力,对内脏血管有扩张作用,增加血流量,有利于改善休克时重要脏器的血

液供应,适用于感染性、心源性、失血性休克以及心脏停搏时起搏升压。

因多巴胺与四氯苯醌之间的荷移反应,用UV1901PC紫外分光光度计测定针剂中的多巴胺从甜马铃薯中提取多酚氧化酶,将多巴胺氧化为相应多巴胺色素,建立了测定药剂中多巴胺的分光光度法,但操作繁杂。本研究依据多巴胺与亚硝酸钠在水介质中即可生成有较高吸光度产物的反应,建立了测定多巴胺注射液中多巴胺含量的分光光度法。该法操作简便,灵敏迅速,有宽的线性范围,与英国药典规定的液相色谱法对照,结果吻合。

1实验部分

1.1仪器

UV1901PC紫外分光光度计(上海奥析);

UV1901PC紫外分光光度计采用滨松无臭氧环保型氘灯，普通长寿命氘灯会有臭氧产生，长期吸入对身体有害，无臭氧长寿命氘灯就可以有效避免。UV1901PC紫外分光光度计还采用德国欧士朗钨灯，美国派来芝检测器，双光束光学系统，加厚光学底板，更能保证仪器的稳定性。操作界面和操作系统都是简便快捷版的，减少了检测时间的同时，增加准确性.吸光度可以到小数点后四位。可选配多种附件，自动四联池，七联池，恒温装置，透过率固体架，反射率固体架等。

UV1901PC紫外分光光度计的显示方式：6英寸 320×240 点阵带背光数字 LCD

光源灯：预调日本滨松无臭氧环保型氘灯 欧司朗长寿命卤钨灯

光学系统：精密双光束光学系统

接口：RS232C串行通讯口用于接配软件，并行打印口用于接配打印机

光谱扫描功能：主机及软件支持

电源电压：100V～240V   50/60±1Hz

仪器尺寸：650×450×220（mm）

净重：25Kg

特点

UV1901PC紫外分光光度计的光学系统设计和电路控制系统设计十分严谨,元器件的选用控制严格,具有高标准的准确度、重复性、低噪声和低杂散光指标，线性范围和稳定性指标也十分出色。有1nm和2nm带宽两种配置适合不同用户选择，大屏幕LCD显示，具高测量精度和稳定性，是一款高品质的仪器。

UV1901PC紫外分光光度计使用日本滨松无臭氧环保型氘灯，使用寿命达到2000小时，光输出可保持稳定直至其使用寿命，替换极为方便。

UV1901PC紫外分光光度计提供2种操作模式：主机测量模式或软件控制测量模式。

内建的SCM技术和定性定量分析软件能实现数据采集与处理、光谱测量、动力学测量、定量分析、DNA测定和光谱扫描等扩展功能。菜单下拉式分析软件易于操作。

UV1901PC紫外分光光度计具有开放式的样品室，可选配反射样品架、固体样品架、恒温水浴和自动进样器等适合于不同的应用。

单机扫描曲线可以存储9条，工作曲线可以存储9条。联机模式储存数量不限。

pHS-3C型酸度计(上海雷磁仪器厂)。

多巴胺标准储备液100LgPmL(化学对照品,中国药品生物制品检定所),准确称取0.01g多巴胺,用二次水稀释至100mL,4e储存,用时稀释为40LgPmL的工作液。NaNO2(10gPL)水溶液,避光保存。HAc-NaAc缓冲溶液(pH5.90),0.1molPLHAc和0.1molPLNaAc以1B16的体积比混合。

所用试剂均为分析纯,实验用水均为二次水。

1.2实验方法

准确移取40LgPmL的多巴胺标准液2mL于10mL比色管中,加NaNO2溶液2mL,HAc-NaAc缓冲溶液5mL,摇匀,置于沸水浴中加热3.5min。取出用流水冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀。以试剂空白为参比,用1cm比色皿在300nm处测量其吸光度。

2结果与讨论

2.1吸收光谱

按实验方法配制溶液后,在分光光度计上,以试剂空白为参比扫描溶液的吸光度,得到吸收光谱如图1所示。由图可见,反应产物Kmax=300nm。NaNO2的Kmax为356nm;多巴胺的Kmax为279nm。

2.2反应影响因素研究

2.1加热时间影响

多巴胺在加热不同时间后的吸光度,结果表明加热时间为3~4min时,吸光度zui大。所以选择加热时间为3.5min。

2.2pH的影响按实验方法测量不同pH值时溶液的吸光度,

结果如图2所示。

图1图2

由图可见,pH5.9时,溶液的吸光度zui大。所以选择pH5.9的HAc-NaAc缓冲溶液,但要严格控制pH值,每次加入缓冲溶液510mL。

2.3试剂用量影响按照实验方法,保持多巴胺浓度不变,逐步增大NaNO2(10gPL)的加入量,测定溶液的吸光度。结果发现,随着NaNO2加入量的增大,溶液的吸光度逐渐增大;当加入量\1.5mL时,溶液的吸光度基本不变,所以确定*加入量为2mL。

2.4试剂加入顺序影响按照实验方法,依照不同顺序加入试剂,测量溶液的吸光度,结果表明试剂加入的*顺序为先加NaNO2后加HAc-NaAc缓冲溶液。

2.2.5产物的稳定性按照实验方法,测定放置不同时间后溶液的吸光度,结果表明,放置时间在90min之内溶液的吸光度基本不变,产物比较稳定。

2.3选择性

按照实验方法,研究4LgPmL多巴胺水溶液中各种外来常见离子对体系的影响,控制测定误差在5%以内,下列离子的允许存在量(LgPmL)为:K+(30)、Mg2+(25)、Cu2+(25)、Pb2+(10)、Cl-(60)、Ca2+(10)、Zn2+(100)、HPO42-(10)、PO43-(6)、SO42-(300)

2.4方法特性

2.4.1标准曲线按实验方法配制多巴胺的标准系列,分别测定其吸光度,实验表明多巴胺的浓度在0~10LgPmL范围内与吸光度呈线性关系,线性回归方程为:A=010436c+0100591,r=0.9978。

2.4.2检测限平行测定试剂空白的吸光度,按照空白加3倍标准偏差所对应的浓度,检测限为0.1LgPmL。

2.4.3精密度按照实验方法将同一样品测定10次,多巴胺的平均质量浓度为2.0LgPmL,相对标准偏差为5.3%。

2.5样品分析

2.5.1多巴胺注射液样品分析多巴胺的注射液

用二次水稀释至不同浓度,作为样品溶液进行检测。结果见表1。从表可看出,用分光光度法测定

所得结果与用HPLC法相符,在置信度等于95%,用Cochran检验两种方法间不存在显著性差异。

表1样品的测定

5.2回收率按实验方法,测定多巴胺注射液的回收率,结果如表2所示。

表2

结论

本文建立了用分光光度法测定多巴胺注射液中多巴胺的方法,该法操作简单,检出限低,线性范围较宽。