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UV1901PC紫外可见分光光度计法测定水杨酸的含量
时间:2017-05-09 点击次数:1316

UV1901PC紫外可见分光光度计法测定水杨酸的含量 

.UV1901PC紫外可见分光光度计简介

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

.UV1901PC紫外可见分光光度计法原理

分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对物质进行定性或定量分析。

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。由于分子结构不同但只要具有相同的生色团,它们的zui大吸收波长值就相同。因此,通过对末知化合物的扫描光谱、zui大吸收波长值与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较,就可获得基础鉴定。 

1-苯甲酸;2-水杨酸 

水杨酸在波长300 nm处有吸收峰,而苯甲酸此处无吸收,在波长230 nm两组吸收峰重叠,为了避开其干扰,选用300 nm波长作为测定水杨酸的工作波长。由于乙醇在250350nm无吸收干扰,因此可用60%乙醇为参比溶液。

.仪器与试剂 

1.仪器 

UV1901PC紫外可见分光光度计;容量瓶100mL 1个、50mL 5个;刻度吸量管1mL2mL5mL1  2.试剂 

水杨酸对照品(分析纯);60%乙醇溶液(自制)。

 

 四、实验步骤 

1、标准溶液的制备:准确称取0.0500 g水杨酸置于100 mL烧杯中,用60%乙醇溶解后,转移到100 mL容量瓶中,以60%乙醇稀释至刻度,摇匀。此溶液浓度为0.5mg·mL-1 

2、将五个50mL容量瓶按1-5依次编号。分别移取水杨酸标准溶液0.501.002.003.004.00mL于相应编号容量瓶中,各加入60%乙醇溶液,稀释至刻度,摇匀。 

3、用1 cm石英吸收池、,以60%乙醇作为参比溶液,在200350 nm波长范围内测定一份水杨酸标准溶液的紫外吸收光谱,确定zui大吸收波长。 

4、在选定波长下,以60%乙醇为参比溶液,由低浓度到高浓度测定水杨酸标准溶液系列及未知液的吸光度。以水杨酸标准溶液的吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,根据水杨酸试液的吸光度,通过标准曲线计算水杨酸试样中水杨酸的含量。 

 

五、数据处理 

  1. 根据某一浓度下的全波长扫描图,确定zui佳吸收波长。

 2、绘制标准曲线,计算工作曲线方程及R2值。

 3、计算未知样中水杨酸的浓度。 

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