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紫外分光光度法测定牛樟芝子实体的总三萜含量
时间:2018-10-13 点击次数:718

牛樟芝(Antrodia camphorate T.T.Chang & W.N. Chou)是台湾一种罕见的药用真菌,属担子菌门菌 蔁纲无褶菌目多孔菌科薄孔菌属,又名樟芝、樟菇、 牛樟菇、红樟芝、血灵芝,牛樟芝生长在台湾特有的 牛樟树的内部心材上。 牛樟树仅在台湾生长,主要 分布在海拔 450~2 000 m 的阔叶林中,生长缓慢。 近年来,人工培养牛樟芝逐渐兴起,主要有椴木栽 培、液体培养、固体培养三种方法[1]。 牛樟芝活性成 分多种,其中已被鉴定的超过 200 种,主要有三萜、 多糖及糖蛋白、类固醇、木脂素、苯醌衍生物、马来 酸和琥珀酸衍生物等[2]。 现代研究表明:牛樟芝具 有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、保肝、预防肝纤维化、神经 保护、舒张血管、抗高血压等作用[3]。 其中,三萜是 牛樟芝的主要活性成分之一,也是牛樟芝苦味的主 要来源,具有抗肿瘤、保肝、降血压等作用[4]。 本研 究通过比色法测定人工培育牛樟芝子实体的总三 萜含量,为牛樟芝子实体的开发利用提供一定的实 验依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器 UV-1800 紫外可见分光光度计;1.2 材料 熊果酸(纯度≥98%,;香兰素、高氯酸、冰 乙酸、甲醇均为分析纯

2 方法与结果 2.1 牛樟芝醇提物的制备 牛樟芝子实体切片, 60℃干燥后粉碎,过 40 目筛,60 ℃干燥至恒重。 取 牛樟芝粉末 20 g, 加入 400 mL 95%乙醇回流提取3 次,过滤,滤液浓缩干燥即得牛樟芝的醇提物。 牛樟 芝醇提物平均得率为(35.47±0.15)%,RSD 为0.4%。 2.2 供试品溶液的制备 精密称取牛樟芝醇提物 5 mg 加甲醇定容至 10 mL,配制成 0.5 mg/mL 的供 试品溶液。 2.3 标准曲线的绘制 精密称取熊果酸 2.04 mg, 加甲醇定容至 10 mL,得 0.204 mg/mL 的熊果酸对 照品溶液。 精密量取 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mL 于试管中,水浴挥干,加 5%香草醛-冰乙酸溶液 0.2 mL、高氯酸 0.8 mL,60℃水浴 15 min,再冰水浴 5 min,加 5 mL 冰乙酸,摇匀后放置至室温,于 510 nm 处测定吸光度。 以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标, 绘制标准曲线,得线性回归方程:Y=4.16×10-2X- 7.85×10-2,r 值=0.999 1。 熊果酸在 3.4~27.2 μg/ mL 范围内线性关系良好。

2.4 方法学考察 2.4.1 精密度 取浓度为 0.2 mg/mL 的对照品溶 液,按 2.3 下的方法进行测定,平行 6 份,得 RSD 值 为 2.34%,表明仪器精密度良好。 2.4.2 重复性 取供试品 6 份,配制成 0.5 mg/mL 的待测溶液;取 600 μL 的供试品溶液,按 2.3 下的方法测定吸光度, 计算三萜含量,RSD 值为 3.3%, 表明重复性良好。 2.4.3 稳定性 精密量取样品,按 2.3 下的方法测 定吸光度,每 15 min 测定 1 次,在 2 h 内显色稳定, RSD 值为 1.77%,表明待测样品溶液在 2 h 内稳定。 2.4.4 加样回收率实验 取已知含量的供试品 6份,按照 1∶1 的比例加入一定量的对照品混匀,精密 吸取混匀后的供试品溶液, 按 2.3 下的方法测定吸 光度,计算加样回收率和 RSD 值,结果见表 1。 计算 得平均加样回收率为 102.0%,RSD 为 1.96%, 加样 回收率范围 99.40%~104.63%,表明该方法具有良 好的加样回收率。

2.5 牛樟芝醇提物中总三萜的含量测定 取牛樟 芝醇提物粉末 5 mg,定容至 10 mL,即得 0.5 mg/mL 的供试品溶液;取 600 μL 样品溶液,按 2.3 下的操 作方法进行测定,计算醇提物中总三萜的含量,平行 3 份。 测得牛樟芝醇提物中总三萜含量为(29.40± 0.97)%,相当于干品牛樟芝总三萜含量为 10.43%。 3 讨 论 牛樟芝作为传统药物在台湾民间用以解食物 中毒、解酒、保肝、治疗腹泻及皮肤瘙痒等症[5]。 近 年来由于牛樟芝的人工培养技术日渐成熟, 迫切 需要建立牛樟芝的质量评价标准,以为其开发利用 提供理论依据[6]。 三萜是牛樟芝子实体的重要活性成分之一,可 作为评价其质量的重要指标之一。 本文以熊果酸作 为对照品,采用比色法对牛樟芝总三萜含量进行了 测定,结果表明牛樟芝中总三萜含量高达 10.43%。该方法测定三萜重复性好,可作为评价牛樟芝子实 体质量的方法之一。 

 

 

 

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