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紫外可见分光光度计法测羟胺残留量
时间:2016-05-24 点击次数:1665

羟胺残留量测定法

本法系依据在碱性条件下,羟胺与碘反应生成亚硝

. 然后与对氨基苯磺酸发生重氮化反应,再与CT萘胺偶

联形成有色的偶氮化合物,采用紫外-可见分光光度法测

定羟胺的含童。

试剂1) 6%乙酸钠溶液称取无水乙酸钠6g

适显水溶解并稀释至100ml混勻,即得。

(2) 1% 对氨基苯磺酸溶液称取对氨基苯磺酸

0. 50g,加适M 2 5 %乙酸溶液溶解后稀释至50ml,即得。

(3) 1 . 3 %碘溶液称取碘0.65g ; 溶于冰醋酸,稀

释至5 0 m l ,即得。于通风橱中配制和使用。

(4) 0. 4mol/L硫代硫酸钠溶液称取硫代硫酸钠

3. 16g,溶于适量水中,稀释至5 0 m l ,即得。

(5) 0. 6 % a-萘胺溶液称取a-萘胺0. 3 g . 溶于30%

乙酸,稀释至50ml,即得。于通风橱中配制和迚jfl

盐酸羟胺对照品溶液的制备用水将盐酸羟胺对照品

M 稀释至每l m llOOOnmol,作为贮备液。精密量取

贮备液适量,用水定量稀释至每l m l150nmol

120nmol90nmol60nmol 30nmol,作为不同浓度的对照品溶液,用前配制。

测定法精密量取供试品0.3ml置试管内,依次加

6 % 乙酸钠溶液1.3ml1 % 对氨基苯磺酸溶液0.2ml

1 . 3 %碘液0.1ml,混匀,放置1 0分钟,加0. 4mol/L

代硫酸钠溶液50M1,混匀脱色,加0. 6 % a-萘胺溶液40^1

混匀,室温放置6 0分钟,经每分钟10 000转离心5 分钟

后,取上清液,照紫外-可见分光光度法C通则0401) ,

波长52 0 n m处测定吸光度。精密量取不同浓度的对照品

溶液各0.3tnl,置试管中,自依次加6% 乙酸钠溶液

中国药典2015年版

1.3ml起,同法操作。精密量取水0.3ml置试管中,自

6 % 乙酸钠溶液1.3ml起,同法操作,作为空白对

照。以对照品溶液的羟胺浓度对相应吸光度作直线回归,

求得直线回归方程;将测得的供试品的吸光度代人直线回

归方程,即得供试品的残留羟胺浓度(nmol/ml) ,再根据

供试品的蛋白质含量按下式计算出羟胺残留量(nmol/mg

蛋白质)。

供试品羟胺残留量供试品的残留羟胺浓度(nmol/ml)

(nmol/mg蛋白质) 供试品的蛋白质含量(mg/ml)

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