UV1901紫外分光光度计测葡萄糖的方法

测定葡萄糖是临床化学中的重要检测项目，钼类杂多酸是光度分析中的重要显色剂，主要用来测定硅、磷等物质。葡萄糖在适当条件下能有显色反应，其吸光度与葡萄糖浓度呈线性关系.

实验仪器与试剂

UV1901紫外分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）

UV1901紫外分光光度计采用滨松无臭氧环保型氘灯，普通长寿命氘灯会有臭氧产生，长期吸入对身体有害，无臭氧长寿命氘灯就可以有效避免。仪器还采用德国欧士朗钨灯，美国派来芝检测器，双光束光学系统，加厚光学底板，更能保证仪器的稳定性。操作界面和操作系统都是简便快捷版的，减少了检测时间的同时，增加准确性.吸光度可以到小数点后四位。可选配多种附件，自动四联池，七联池，恒温装置，透过率固体架，反射率固体架等。

UV1901紫外分光光度计的显示方式：6英寸 320×240 点阵带背光数字 LCD

光源灯：预调日本滨松无臭氧环保型氘灯 欧司朗长寿命卤钨灯

光学系统：精密双光束光学系统

接口：RS232C串行通讯口用于接配软件，并行打印口用于接配打印机

光谱扫描功能：主机及软件支持

电源电压：100V～240V   50/60±1Hz

仪器尺寸：650×450×220（mm）

净重：25Kg

特点

UV1901紫外分光光度计的光学系统设计和电路控制系统设计十分严谨,元器件的选用控制严格,具有高标准的准确度、重复性、低噪声和低杂散光指标，线性范围和稳定性指标也十分出色。有1nm和2nm带宽两种配置适合不同用户选择，大屏幕LCD显示，具高测量精度和稳定性，是一款高品质的仪器。

UV1901紫外分光光度计使用日本滨松无臭氧环保型氘灯，使用寿命达到2000小时，光输出可保持稳定直至其使用寿命，替换极为方便。

UV1901紫外分光光度计提供2种操作模式：主机测量模式或软件控制测量模式。

内建的SCM技术和定性定量分析软件能实现数据采集与处理、光谱测量、动力学测量、定量分析、DNA测定和光谱扫描等扩展功能。菜单下拉式分析软件易于操作。

UV1901紫外分光光度计具有开放式的样品室，可选配反射样品架、固体样品架、恒温水浴和自动进样器等适合于不同的应用。

单机扫描曲线可以存储9条，工作曲线可以存储9条。联机模式储存数量不限。

主要技术指标  

分析软件

舒适的操作感受和丰富的分析功能--UVCON系列定性定量数据处理分析软件

UVCON系列定性定量数据处理分析软件是为上海奥析科学仪器有限公司的1700、1800和1900三个系列仪器的分析软件。通过通讯电缆将仪器主机的RS232C通讯口与电脑上的串行通讯口或USB口联接，利用软件对主机的运行进行控制，并对主机采集到的数据进行分析、处理或输出，帮助完成从常规质控到环保、生物化学、医学卫生、材料等诸多领域的分析研究。

●光谱测量

  峰谷检测                             扫描参数设定                   扫描图谱

●动力学测量

动力学测量可测定从1秒-10小时的透射比或吸光度的时间变化，记录间隔从0.1-60秒，可以观察快速的反应和变化。在数据处理功能中有峰谷检测和导数运算。

磷钼黄（钠盐）溶液：浓度为0.10mol/l（PH 1,4）盐酸-邻笨二甲酸氢钾缓冲液：浓度为0.4mol/l（PH3.0），使用前将这两种溶液1:1混合，制成即用的磷钼黄混合显色溶液；葡萄糖标准溶液：1.00mol/l。所用试剂均为二级以上，实验用水为二次蒸馏水。

测量方法

于一系列25ml容量瓶中，加入一定量的葡萄糖溶液，加4.0ml磷钼黄混合显色溶液，再加少量蒸馏水，将容量瓶放入沸水浴中加热60min，取出流水冷却，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。静置片刻后，以试剂为空白，于波长690nm处测定其吸光值。

反应温度与时间

在室温下，磷钼黄与葡萄糖混合，即使放置1-2D，也未见发生反应。

然而，当置于沸水浴中时，反应速度将大大提高，60。min后，显色达

zui大。

图1

a—葡萄糖4×10-5molL,加入混合显色溶液4.0mL,25mL体积;b—葡萄

糖2×10-3molL,其它同a

2.1.2 反应酸度的确定 实验表明,磷钼黄与葡

萄糖在pH2～4之间反应比较适宜,pH值太小,显色不*,pH值过大,磷钼黄将分解。

2.1.3 

磷钼黄用量选择 实验了一系列不同浓度磷钼黄的用量,对葡萄糖在2.0×10-3molL、0.1molL的磷钼黄用量为1.8mL时,吸光度已达zui大值。本实验选定为2.0mL。

2.1.4 缓冲液及其用量选择 实验了乙酸2乙酸钠,磷酸盐,柠檬酸2NaOH和HCl2KHC8H4O4缓冲溶液。结果表明,用HCl2KHC8H4O4(pH3.0)缓冲

溶液时,显色比较快。而另外3种缓冲溶液显色速度慢,所以选择了HCl2KHC8H4O4缓冲溶液。其用量为2mL左右时,显色稳定。

2.2 测量吸光度的*波长的选择

通过对显色溶液的波长

扫描实验,波长在690nm附近吸收zui大,选定690nm处为吸光度测定波长。

2.3 共存物质的影响及消除

对8×10-5molL的葡萄糖试液,50倍的SO42-,NO3-,Cl-,F-,醋酸根,柠檬酸根,酒石酸

根,EDTA不影响测定。而SO32-,S2-,NO22-及Fe2-等倍时就严重干扰测定。维生素C严重干扰,但维生素C在室温时,可与磷钼黄*反应,对于维生素C含量不太高时(等量葡萄糖浓度或以下),能利用反应速度的差异,差减扣除其干扰。

2.4 葡萄糖与磷钼黄反应的量的关系

采用等摩尔法测定了葡萄糖与磷钼黄反应量的比例关系,结果见图2。从图可见,当摩尔比为1∶1时,吸光度zui大。从文献[4]报道的钼蓝显色反应机理看,本文研究的显色反应,也可能为氧化还原过程。葡萄糖浓度+磷钼黄浓度=1×10-3molL

2.5 

工作曲线的制作

于一系列25mL的容量瓶中,分别加入1.00molL的葡萄糖0,2,5,10,20,30,50ΛL,再加磷钼黄混合显色溶液4.0mL,添加大约5mL二次蒸馏水,摇匀。沸水浴中加热60min,取出流水冷却,稀释至刻度。1cm比色皿,690nm处测定吸光值A。得到回归方程的实验数据为:y(吸光

度)=218197x(molL)+0.0018,相关系数r=0.9988

2.6 葡萄糖注射液样品的测定

A:葡萄糖注射液100mL瓶装,含葡萄糖10g。

取5.0mL样品,稀释至50mL,摇匀,分析中每份取此溶液200ΛL。

B:葡萄糖氯化钠注射液250mL瓶装,含葡萄糖12.5g。取5.0mL样品,稀释至50mL,摇匀,分析中每份取此溶液500ΛL。按分析方法进行操作,得到的结果见表1